黃芩素抗抑郁作用與酸敏感離子通道在抑郁癥發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、第一部分黃芩素抗抑郁作用及其機(jī)制
　　 目的：抑郁癥是僅次于心腦血管疾病的第二大精神類疾病，嚴(yán)重影響人們的正常生活質(zhì)量。抑郁癥的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，以往的研究多集中于經(jīng)典單胺類神經(jīng)遞質(zhì)在抑郁癥中的作用，目前從增加神經(jīng)生長因子表達(dá)和神經(jīng)保護(hù)角度來研究抗抑郁作用倍受關(guān)注。黃芩素是傳統(tǒng)中藥黃芩的重要成分之一，其化學(xué)成分以黃酮類為主，現(xiàn)已有研究表明，黃酮類中藥通過神經(jīng)保護(hù)機(jī)制等改善抑郁癥狀。但黃芩素是否也有同樣效果，尚未見報(bào)道。本研究旨在

2、通過建立抑郁癥動(dòng)物模型，將行為學(xué)和分子生物學(xué)方法相結(jié)合，探討黃芩素抗抑郁的作用及其機(jī)制。
　　 方法：通過急性和慢性給藥方法，采用小鼠懸尾、小鼠強(qiáng)迫游泳、大鼠強(qiáng)迫游泳，大鼠敞箱實(shí)驗(yàn)的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)，觀察黃芩素對抑郁癥動(dòng)物模型的行為學(xué)作用；采用免疫組織化學(xué)觀察神經(jīng)生長因子（NGF）表達(dá)變化；采用放射性免疫試劑盒觀察血清中皮質(zhì)醇含量變化；采用免疫印跡（western blotting）觀察NGF 信號(hào)下游通路細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）

3、的表達(dá)，及蛋白激酶A、蛋白激酶C的表達(dá)；采用高效液相電化學(xué)方法，測定腦內(nèi)單胺類遞質(zhì)的含量變化。
　　 結(jié)果：急性給予1、2、4 mg/kg 黃芩素均可降低小鼠懸尾和強(qiáng)迫游泳的不動(dòng)時(shí)間，連續(xù)給藥7 d 也可降低大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間。慢性不可預(yù)測應(yīng)激模型大鼠給予黃芩素21d后，可降低大鼠強(qiáng)迫游泳的不動(dòng)時(shí)間，且呈濃度依賴性關(guān)系。在敞箱實(shí)驗(yàn)（OFT）中，可改善大鼠水平和垂直得分。同時(shí)，黃芩素降低血清中皮質(zhì)激素的水平，增加海馬齒狀回NGF

4、的表達(dá)，增加蛋白激酶C、蛋白激酶A、磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶的表達(dá)，并提高腦中單胺類遞質(zhì)含量。
　　 結(jié)論：黃芩素具有抗抑郁癥作用，該作用可能與提高海馬齒狀回NGF的表達(dá)，增強(qiáng)NGF 信號(hào)通路，同時(shí)改善單胺類遞質(zhì)含量等有關(guān)。
　　 第二部分酸敏感離子通道在抑郁癥發(fā)病機(jī)制中的作用
　　 目的：近年來，抗抑郁癥藥物研究除了以增高腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，提高海馬齒狀回神經(jīng)元再生等作為研究靶點(diǎn)外，對于離子通道與抑郁癥的關(guān)系受

5、到越來越多的關(guān)注。其中酸敏感離子通道（acid-sensing ion channels，ASICs）在精神疾病中的作用已成為研究熱點(diǎn)之一，它與驚恐和腦缺血都有十分緊密的聯(lián)系。因此，本研究旨在探討抑郁癥時(shí)ASIC的變化，為抗抑郁癥藥物研究提供新的靶點(diǎn)。
　　 方法：建立不同時(shí)間點(diǎn)的大鼠慢性應(yīng)激模型，采用免疫印跡（western blotting）法，觀察應(yīng)激對大鼠海馬區(qū)ASICs蛋白表達(dá)的變化。采用放射性免疫試劑盒，觀察應(yīng)激前后

6、血清中皮質(zhì)醇含量的改變；給予不同濃度和時(shí)間的皮質(zhì)醇，采用western blotting 觀察培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元ASICs蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：慢性應(yīng)激1天、1周和4周，ASIC1蛋白表達(dá)逐漸增高，在第4周最為明顯。應(yīng)激4周后皮質(zhì)醇含量亦增高。0.1、1、10、100 μM 皮質(zhì)醇孵育海馬神經(jīng)元12 h，濃度依賴性地增加ASIC1表達(dá)。10 μM 皮質(zhì)醇孵育海馬神經(jīng)元12、24 h 可時(shí)間依賴性地增加ASIC1蛋白表達(dá)。