曲克蘆丁對STZ糖尿病大鼠認知功能障礙及海馬血紅素氧合酶-1的影響.pdf

1、目的：糖尿病是當代危害人類健康的三大疾病之一，發(fā)病率逐年上升，其慢性并發(fā)癥遍及全身各重要臟器。糖尿病腦病是指糖尿病引起的認知功能障礙，表現(xiàn)為學習與記憶障礙，其發(fā)病機制尚未明確。目前認為，氧化應激在其中起了重要作用，與糖尿病腦病發(fā)生發(fā)展密切相關。血紅素氧合酶-1(heme oxygenase-1，HO-1)是核因子E2相關因子2(nuclear factorE2-related factor2，Nrf2)通路中最重要的抗氧化蛋白酶。超氧化

2、物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)可反映機體清除氧自由基的能力即抗氧化應激水平。丙二醛(malondialdehyde，MDA)可反映機體自由基含量及脂質過氧化程度從而反映氧化應激水平。α-硫辛酸(α-Lipoic Acid)是已知天然抗氧化劑中抗氧化作用最強的一種，而研究發(fā)現(xiàn)黃酮類中藥曲克蘆丁(troxerutin)也具有抗氧化、抗炎作用。本研究建立具有認知功能障礙的1型糖尿病大鼠模型，以α-硫辛酸為對照，觀

3、察曲克蘆丁對糖尿病大鼠認知功能、HO-1及SOD、MDA的影響。
　　方法：
　　1.STZ糖尿病大鼠模型制備：
　　健康雄性(Sprague-Dawley，SD)大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ60mg/kg)，3天后尾靜脈血糖≥16.7mmol/L者視為造模成功，飼養(yǎng)12周以使糖尿病大鼠出現(xiàn)認知功能障礙。
　　2.分組：
　　健康雄性SD大鼠(體重150～170g)70只，隨

4、機分為正常對照組(NC，n=10)及糖尿病組(DM，n=60)；
　　糖尿病組又隨機分為4組：糖尿病對照組(DC，n=15)，糖尿病鹽水組(DN，等體積生理鹽水腹腔注射，n=15)，糖尿病α-硫辛酸組(DL，60mg/kgα-硫辛酸腹腔注射，n=15)，糖尿病曲克蘆丁組(DT，60mg/kg曲克蘆丁腹腔注射，n=15)，干預6周。
　　3.一般觀察：觀察并記錄大鼠精神狀態(tài)及進食飲水尿量等一般情況，檢測并記錄血糖、體重變化。<

5、br>　　4.行為學實驗：第1、12、18周各組大鼠分別行Morris水迷宮實驗，記錄逃避潛伏期(s)，分析學習記憶能力變化。
　　5.標本制備及觀察指標：藥物干預6周后，取大腦海馬組織，用實時熒光定量(Real-Time Polymerase Chain Reaction，Real-Time PCR)方法檢測HO-1mRNA表達量，蛋白質印跡(Western blot)方法檢測HO-1蛋白含量，黃嘌呤氧化酶法檢測海馬SOD含量，

6、硫代巴比妥酸法檢測海馬MDA含量。
　　6.統(tǒng)計學方法：應用SPSS13.0進行統(tǒng)計學分析，計量資料用均數(shù)±標準差(-X±S)表示，水迷宮數(shù)據(jù)采用重復測量及多元方差分析，Real-TimePCR、Western blot、SOD、MDA結果采用單因素方差分析(One WayANOVA)，均數(shù)間兩兩比較采用Student-Newman-Keuls檢驗，P<0.05為差異有顯著性。
　　結果：
　　1.一般情況觀察、血糖及

7、體重變化正常組大鼠精神狀況良好，毛皮光澤，反應靈敏，攝食量、飲水量及尿量正常，體重顯著增加；糖尿病組大鼠精神狀況差，毛皮污穢無光澤，多尿、多飲、多食，生長緩慢，明顯消瘦，與正常組相比，體重明顯減輕(P<0.01)，血糖明顯升高(P<0.01)。
　　2.Morris水迷宮逃避潛伏期①成模后第1周：糖尿病組與正常對照組無顯著差別(P>0.05)。
　?、诔赡：蟮?2周即干預前：糖尿病組較正常對照組明顯延長(P<0.01)。

8、r>　　③成模后第18周即干預結束：與正常對照組相比，糖尿病α-硫辛酸組、糖尿病曲克蘆丁組、糖尿病對照組、糖尿病鹽水組的逃避潛伏期均明顯延長(P<0.01)；與糖尿病對照組、糖尿病鹽水組相比，糖尿病α-硫辛酸組及糖尿病曲克蘆丁組逃避潛伏期明顯縮短(P<0.01)，糖尿病α-硫辛酸組與糖尿病曲克蘆丁組無顯著差異(P>0.05)；糖尿病對照組與糖尿病鹽水組間無顯著差異(P>0.05)。天數(shù)和組別之間不存在交互作用(P>0.05)。
　

9、　3.Real-Time PCR結果(HO-1mRNA表達)與正常對照組(1±0)相比，糖尿病對照組(0.6705±0.1557)、糖尿病鹽水組(0.6617±0.1122)海馬HO-1mRNA的表達顯著降低(P<0.05)；糖尿病對照組與糖尿病鹽水組間無顯著差異(P>0.05)。
　　與糖尿病對照組及鹽水組相比，糖尿病α-硫辛酸組(0.9933±0.1276)與糖尿病曲克蘆丁組(0.9328±0.1823)海馬HO-1mRNA的

10、表達顯著增高(P<0.05)，達正常對照組水平(P>0.05)；糖尿病α-硫辛酸組與糖尿病曲克蘆丁組間無明顯差別(P>0.05)。
　　4.Western blot結果(HO-1蛋白水平)與正常對照組(1±0)相比，糖尿病對照組(0.8967±0.0257)、糖尿病鹽水組(0.8544±0.0296)海馬HO-1蛋白水平顯著降低(P<0.05)；糖尿病對照組與糖尿病鹽水組間無顯著差異(P>0.05)。
　　與糖尿病對照組及鹽

11、水組相比，糖尿病α-硫辛酸組(1.0539±0.0300)與糖尿病曲克蘆丁組(1.0390±0.0300)海馬HO-1蛋白水平顯著增高(P<0.05)，達正常對照組水平(P>0.05)；糖尿病α-硫辛酸組與糖尿病曲克蘆丁組間無明顯差別(P>0.05)。
　　5.海馬SOD、MDA量①SOD活力：
　　與正常對照組(115.98±7.57)相比，糖尿病對照組(61.81±3.94)、糖尿病鹽水組(68.24±7.62)海馬SO

12、D活力明顯降低(P<0.05)；糖尿病對照組與糖尿病鹽水組間無顯著差異(P>0.05)。
　　與糖尿病對照組及糖尿病鹽水組相比，糖尿病α-硫辛酸組(200.32±6.17)與糖尿病曲克蘆丁組(191.99±11.41)海馬SOD活力明顯升高(P<0.05)，并且高于正常對照組(P<0.05)；糖尿病α-硫辛酸組與糖尿病曲克蘆丁組間無顯著差異(P>0.05)。
　?、贛DA含量：與正常對照組(2.74±0.21)相比，糖尿病對

13、照組(3.83±0.11)、糖尿病鹽水組(3.71±0.20)海馬MDA含量明顯升高(P<0.05)；糖尿病對照組與糖尿病鹽水組間無顯著差異(P>0.05)。
　　與糖尿病對照組及糖尿病鹽水組相比，糖尿病α-硫辛酸組(2.02±0.23)與糖尿病曲克蘆丁組(2.54±0.20)海馬MDA含量明顯降低(P<0.05)；糖尿病曲克蘆丁組與正常對照組間無顯著性差別(P>0.05)，糖尿病α-硫辛酸組海馬MDA含量最低，顯著低于曲克蘆丁組

14、及正常對照組(P<0.05)。
　　結論：
　　1.糖尿病可引起大鼠學習記憶能力下降，STZ糖尿病大鼠12周時已出現(xiàn)明顯認知障礙；
　　2.STZ糖尿病大鼠海馬組織HO-1mRNA表達降低，HO-1蛋白含量降低，說明糖尿病大鼠海馬存在抗氧化障礙，加重氧化應激損害；
　　3.曲克蘆丁可改善STZ糖尿病大鼠認知功能障礙，效果與α-硫辛酸相當；
　　4.曲克蘆丁能夠上調STZ糖尿病大鼠海馬HO-1mRNA表達及H