曲克蘆丁對(duì)糖尿病大鼠認(rèn)知功能及NADPH氧化酶p22phox亞基的影響.pdf

1、目的：隨著糖尿病發(fā)病率的逐年提高，糖尿病中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變成為目前研究熱點(diǎn)，主要表現(xiàn)為認(rèn)知功能障礙，但其發(fā)病機(jī)制目前尚未十分明確，氧化應(yīng)激是其重要發(fā)病機(jī)制之一，NADPH氧化酶(NOX)在氧化應(yīng)激中起中樞作用。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)，是檢驗(yàn)體內(nèi)氧化應(yīng)激水平的重要指標(biāo)。本研究以強(qiáng)抗氧化劑α-硫辛酸(α-lipoic acid，α-LA)為對(duì)照，觀察具有強(qiáng)抗氧化作用的黃酮類中藥曲克蘆丁對(duì)糖尿病大鼠行為學(xué)、NADPH氧化酶的

2、p22phox亞基及SOD、MDA的影響。
　　方法：
　　1糖尿病大鼠模型制備：
　　雄性SD大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ60mg/kg)，3天后尾靜脈血糖≥16.7mmol/L者納為STZ糖尿病大鼠，大鼠成模后每周測(cè)體重及尾靜脈隨機(jī)血糖，剔除血糖小于16.7mmol/L的大鼠。飼養(yǎng)12周制備認(rèn)知功能障礙模型。
　　2分組
　　健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠(體重150～170g)70

3、只，隨機(jī)分為：
　　正常對(duì)照組(NC)10只，糖尿病組(DM)60只；
　　糖尿病組又隨機(jī)分為：糖尿病對(duì)照組(DC)15只；糖尿病鹽水組(DN，等體積腹腔注射生理鹽水)15只；糖尿病α-硫辛酸組(DL，60mg/kg腹腔注射α-硫辛酸)15只；糖尿病曲克蘆丁組(DT，60mg/kg腹腔注射曲克蘆丁)15只，干預(yù)6周。
　　3一般觀察：觀察記錄大鼠的精神狀態(tài)、進(jìn)食飲水尿量等一般情況及血糖、體重的變化。
　　4行為學(xué)

4、實(shí)驗(yàn)：各組大鼠于第1周、12周、18周分別進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，記錄逃避潛伏期(S)，分析糖尿病大鼠學(xué)習(xí)能力的變化。
　　5標(biāo)本制備及觀察指標(biāo)：藥物干預(yù)6周后，取大腦海馬組織用黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)海馬超氧化物歧化酶(SOD)的活力，硫代巴比妥酸法檢測(cè)海馬丙二醛(MDA)含量，用Real-Time RCR的方法檢測(cè)p22phox mRNA的表達(dá)量，用蛋白質(zhì)印跡(Western blot)的方法檢測(cè)p22phox蛋白的含量。

5、>　　6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用重復(fù)測(cè)量的方差分析、多元方差分析、完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的單因素方差分析(One Way ANOVA)，均數(shù)間兩兩比較采用Student-Newman-Keuls檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有顯著性。
　　結(jié)果：
　　1一般情況觀察、血糖及體重：
　　正常對(duì)照組大鼠精神狀態(tài)良好，皮毛純白且有光澤，進(jìn)食和飲水量以及尿量均正常，體重穩(wěn)步增長(zhǎng)(338.21±43.47)；糖尿組

6、大鼠精神萎靡，毛色枯黃稀疏無(wú)光澤，多尿、多飲、多食，體重(290.25±40.31)明顯減輕(P<0.05)，血糖(27.35±4.31)較正常組(6.89±0.65)明顯升高(P<0.05)，干預(yù)過(guò)程中曲克蘆丁組大鼠的一般情況優(yōu)于α-硫辛酸組。
　　2 Morris水迷宮結(jié)果(逃避潛伏期)：
　　糖尿病成模第1周，糖尿病組與正常對(duì)照組間無(wú)顯著差別(P>0.05)；
　　糖尿病成模第12周(藥物干預(yù)前)，糖尿病組較正常

7、對(duì)照組明顯延長(zhǎng)(P<0.05)；
　　糖尿病成模第19周(藥物干預(yù)后)，糖尿病α-硫辛酸組與糖尿病曲克蘆丁組均較糖尿病鹽水組及糖尿病對(duì)照組明顯縮短，但仍高于正常對(duì)照組(P<0.05)；α-硫辛酸組與曲克蘆丁組間無(wú)顯著差異(P>0.05)；糖尿病鹽水組與糖尿病對(duì)照組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。組別和天數(shù)之間不存在交互作用(P>0.05)。
　　3 SOD、MDA結(jié)果：
　　SOD活力：糖尿病鹽水組(68.24±7.62

8、)、糖尿病對(duì)照組(61.81±3.94)較正常對(duì)照組(115.98±7.57)明顯降低(P<0.05)；糖尿病α-硫辛酸組(200.32±6.1)與糖尿病曲克蘆丁組(191.99±11.41)均較糖尿病鹽水組、糖尿病對(duì)照組明顯升高(P<0.05)；糖尿病α-硫辛酸組與糖尿病曲克蘆丁組間無(wú)顯著差異(P>0.05)；糖尿病鹽水組與糖尿病對(duì)照組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　MDA含量：糖尿病鹽水組(3.71±0.20)、糖尿病對(duì)照

9、組(3.83±0.11)均較正常對(duì)照組(2.74±0.21)明顯升高(P<0.05)；糖尿病α-硫辛酸組(2.02±0.23)與糖尿病曲克蘆丁組(2.54±0.20)均較糖尿病鹽水組、糖尿病對(duì)照組明顯降低(P<0.05)；糖尿病α-硫辛酸組低于糖尿病曲克蘆丁組(P<0.05)；糖尿病鹽水組與糖尿病對(duì)照組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　4 Red-Time PCR結(jié)果(p22phox mRNA的表達(dá))：
　　糖尿病鹽水組(

10、1.48±0.28)、糖尿病對(duì)照組(1.50±0.33)較正常對(duì)照組(1±0)明顯升高(P<0.05)；糖尿病α-硫辛酸組(0.65±0.21)與糖尿病曲克蘆丁組(0.74±0.26)均較糖尿病鹽水組、糖尿病對(duì)照組明顯降低(P<0.05)；糖尿病α-硫辛酸組與糖尿病曲克蘆丁組間無(wú)顯著差異(P>0.05)；糖尿病鹽水組與糖尿病對(duì)照組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　5 Western blot結(jié)果(p22phox蛋白的含量)：

11、r>　　糖尿病鹽水組(1.48±0.28)、糖尿病對(duì)照組(1.50±0.33)較正常對(duì)照組(1±0)明顯升高(P<0.05)；糖尿病α-硫辛酸組(0.65±0.21)與糖尿病曲克蘆丁組(0.74±0.26)均較糖尿病鹽水組、糖尿病對(duì)照組明顯降低(P<0.05)；糖尿病α-硫辛酸組與糖尿病曲克蘆丁組無(wú)顯著差異(P>0.05)；糖尿病鹽水組與糖尿病對(duì)照組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1糖尿病可以導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙