曲克蘆丁對糖尿病大鼠認(rèn)知功能及NADPH氧化酶p22phox亞基的影響.pdf

1、目的：隨著糖尿病發(fā)病率的逐年提高，糖尿病中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變成為目前研究熱點，主要表現(xiàn)為認(rèn)知功能障礙，但其發(fā)病機制目前尚未十分明確，氧化應(yīng)激是其重要發(fā)病機制之一，NADPH氧化酶(NOX)在氧化應(yīng)激中起中樞作用。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)，是檢驗體內(nèi)氧化應(yīng)激水平的重要指標(biāo)。本研究以強抗氧化劑α-硫辛酸(α-lipoic acid，α-LA)為對照，觀察具有強抗氧化作用的黃酮類中藥曲克蘆丁對糖尿病大鼠行為學(xué)、NADPH氧化酶的

2、p22phox亞基及SOD、MDA的影響。
　　方法：
　　1糖尿病大鼠模型制備：
　　雄性SD大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ60mg/kg)，3天后尾靜脈血糖≥16.7mmol/L者納為STZ糖尿病大鼠，大鼠成模后每周測體重及尾靜脈隨機血糖，剔除血糖小于16.7mmol/L的大鼠。飼養(yǎng)12周制備認(rèn)知功能障礙模型。
　　2分組
　　健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠(體重150～170g)70

3、只，隨機分為：
　　正常對照組(NC)10只，糖尿病組(DM)60只；
　　糖尿病組又隨機分為：糖尿病對照組(DC)15只；糖尿病鹽水組(DN，等體積腹腔注射生理鹽水)15只；糖尿病α-硫辛酸組(DL，60mg/kg腹腔注射α-硫辛酸)15只；糖尿病曲克蘆丁組(DT，60mg/kg腹腔注射曲克蘆丁)15只，干預(yù)6周。
　　3一般觀察：觀察記錄大鼠的精神狀態(tài)、進食飲水尿量等一般情況及血糖、體重的變化。
　　4行為學(xué)

4、實驗：各組大鼠于第1周、12周、18周分別進行Morris水迷宮實驗，記錄逃避潛伏期(S)，分析糖尿病大鼠學(xué)習(xí)能力的變化。
　　5標(biāo)本制備及觀察指標(biāo)：藥物干預(yù)6周后，取大腦海馬組織用黃嘌呤氧化酶法檢測海馬超氧化物歧化酶(SOD)的活力，硫代巴比妥酸法檢測海馬丙二醛(MDA)含量，用Real-Time RCR的方法檢測p22phox mRNA的表達量，用蛋白質(zhì)印跡(Western blot)的方法檢測p22phox蛋白的含量。

5、>　　6統(tǒng)計學(xué)方法：應(yīng)用SPSS13.0進行統(tǒng)計學(xué)分析，采用重復(fù)測量的方差分析、多元方差分析、完全隨機設(shè)計的單因素方差分析(One Way ANOVA)，均數(shù)間兩兩比較采用Student-Newman-Keuls檢驗。以P<0.05為差異有顯著性。
　　結(jié)果：
　　1一般情況觀察、血糖及體重：
　　正常對照組大鼠精神狀態(tài)良好，皮毛純白且有光澤，進食和飲水量以及尿量均正常，體重穩(wěn)步增長(338.21±43.47)；糖尿組

6、大鼠精神萎靡，毛色枯黃稀疏無光澤，多尿、多飲、多食，體重(290.25±40.31)明顯減輕(P<0.05)，血糖(27.35±4.31)較正常組(6.89±0.65)明顯升高(P<0.05)，干預(yù)過程中曲克蘆丁組大鼠的一般情況優(yōu)于α-硫辛酸組。
　　2 Morris水迷宮結(jié)果(逃避潛伏期)：
　　糖尿病成模第1周，糖尿病組與正常對照組間無顯著差別(P>0.05)；
　　糖尿病成模第12周(藥物干預(yù)前)，糖尿病組較正常

7、對照組明顯延長(P<0.05)；
　　糖尿病成模第19周(藥物干預(yù)后)，糖尿病α-硫辛酸組與糖尿病曲克蘆丁組均較糖尿病鹽水組及糖尿病對照組明顯縮短，但仍高于正常對照組(P<0.05)；α-硫辛酸組與曲克蘆丁組間無顯著差異(P>0.05)；糖尿病鹽水組與糖尿病對照組間無顯著差異(P>0.05)。組別和天數(shù)之間不存在交互作用(P>0.05)。
　　3 SOD、MDA結(jié)果：
　　SOD活力：糖尿病鹽水組(68.24±7.62

8、)、糖尿病對照組(61.81±3.94)較正常對照組(115.98±7.57)明顯降低(P<0.05)；糖尿病α-硫辛酸組(200.32±6.1)與糖尿病曲克蘆丁組(191.99±11.41)均較糖尿病鹽水組、糖尿病對照組明顯升高(P<0.05)；糖尿病α-硫辛酸組與糖尿病曲克蘆丁組間無顯著差異(P>0.05)；糖尿病鹽水組與糖尿病對照組間無顯著差異(P>0.05)。
　　MDA含量：糖尿病鹽水組(3.71±0.20)、糖尿病對照

9、組(3.83±0.11)均較正常對照組(2.74±0.21)明顯升高(P<0.05)；糖尿病α-硫辛酸組(2.02±0.23)與糖尿病曲克蘆丁組(2.54±0.20)均較糖尿病鹽水組、糖尿病對照組明顯降低(P<0.05)；糖尿病α-硫辛酸組低于糖尿病曲克蘆丁組(P<0.05)；糖尿病鹽水組與糖尿病對照組間無顯著差異(P>0.05)。
　　4 Red-Time PCR結(jié)果(p22phox mRNA的表達)：
　　糖尿病鹽水組(

10、1.48±0.28)、糖尿病對照組(1.50±0.33)較正常對照組(1±0)明顯升高(P<0.05)；糖尿病α-硫辛酸組(0.65±0.21)與糖尿病曲克蘆丁組(0.74±0.26)均較糖尿病鹽水組、糖尿病對照組明顯降低(P<0.05)；糖尿病α-硫辛酸組與糖尿病曲克蘆丁組間無顯著差異(P>0.05)；糖尿病鹽水組與糖尿病對照組間無顯著差異(P>0.05)。
　　5 Western blot結(jié)果(p22phox蛋白的含量)：

11、r>　　糖尿病鹽水組(1.48±0.28)、糖尿病對照組(1.50±0.33)較正常對照組(1±0)明顯升高(P<0.05)；糖尿病α-硫辛酸組(0.65±0.21)與糖尿病曲克蘆丁組(0.74±0.26)均較糖尿病鹽水組、糖尿病對照組明顯降低(P<0.05)；糖尿病α-硫辛酸組與糖尿病曲克蘆丁組無顯著差異(P>0.05)；糖尿病鹽水組與糖尿病對照組間無顯著差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1糖尿病可以導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙