曲克蘆丁對STZ糖尿病大鼠認知功能障礙及Nrf2表達的影響.pdf

1、目的：糖尿病腦病亦稱為糖尿病相關認知減退，主要特征為學習和記憶功能障礙。新近研究顯示氧化應激是糖尿病腦病發(fā)生和發(fā)展的重要影響因素。核因子E2相關因子2(Nuclear factor E2-related factor2，Nrf2)是調(diào)控細胞內(nèi)源性抗氧化應激防御體系的核心轉錄因子。超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase。SOD)和丙二醛(Malondialdehyde，MDA)是反應組織氧化抗氧化平衡的經(jīng)典指標。本實驗旨

2、在探討曲克蘆丁對鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)糖尿病大鼠認知功能障礙以及海馬中Nrf2表達、SOD活力和MDA含量的影響。
　　方法：
　　1糖尿病大鼠模型制備：健康雄性SD(Sprague Dawley)大鼠70只(體重150-170g)，隨機分為正常對照組(NC組n=10)，糖尿病組(DC組n=60)，糖尿病組大鼠空腹過夜后一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)60mg/kg，72h后測尾靜脈隨機血糖，血

3、糖≥16.7mmol/l為成模標準。成模后第1周和第12周分別行Morris水迷宮實驗，第12周水迷宮實驗后將糖尿病組隨機分為糖尿病對照組(DC組，n=15)，糖尿病鹽水組(DN組，n=15)，糖尿病α-硫辛酸干預組(DL組，n=15)，糖尿病曲克蘆丁干預組(DT組n=15)。
　　2干預：動物成模后第13周，DL組腹腔注射α-硫辛酸(60mg/kg體重)、DT組腹腔注射曲克蘆丁(60mg/kg體重)、DN組和NC組腹腔注射等量生

4、理鹽水每日注射1次，歷時6周。
　　3行為學檢測：各組大鼠于成模1周、12周和18周時分別進行Morris水迷宮實驗，記錄逃避潛伏期。
　　4標本制備及觀察指標：18周做完水迷宮實驗次日，處死大鼠，迅速取出海馬組織測定SOD活力及MDA含量、提取組織總RNA進行Nrf2基因?qū)崟r熒光定量.聚合酶鏈反應法(R-T PCR)檢測mRNA水平以及通過蛋白免疫印跡法(Western-blot)檢測細胞Nrf2總蛋白及核蛋白的表達。所得

5、數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包處理，應用重復測量方差分析、多元方差分析及完全隨機設計的單因素方差分析統(tǒng)計數(shù)據(jù)，用均數(shù)±標準差表示統(tǒng)計結果，p<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1一般指標觀察：
　　糖尿病大鼠造模造模成功后即出現(xiàn)多尿、多飲、多食等癥狀，血糖維持在較高水平(>20.0mmol/l)，隨著實驗進展，逐漸出現(xiàn)便溏、體重下降、毛色枯黃、反應遲鈍等現(xiàn)象。正常對照組大鼠毛色滑亮，體重穩(wěn)定增長。干預

6、過程中，曲克蘆丁組大鼠一般情況比α-硫辛酸組好。
　　2 Morris水迷宮結果：
　　第1周時，與正常組大鼠相比，糖尿病組大鼠逃避潛伏期無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，NC組和DC組認知功能無差異。
　　第12周時，與正常組大鼠相比，糖尿病組大鼠逃避潛伏期延長(p<0.05)，且在相同時間點兩組逃避潛伏期有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，提示成模后12周，糖尿病大鼠出現(xiàn)糖尿病認知功能障礙。
　　第18周時，糖尿病對照

7、組逃避潛伏期與糖尿病鹽水組相比無顯著差異(P>0.05)。α-硫辛酸干預組與曲克蘆丁干預組均比糖尿病對照組(糖尿病鹽水組)縮短，但仍長于正常對照組(P<0.05)；α-硫辛酸干預組與曲克蘆丁干預組間無顯著差異(P>0.05)。
　　3 R-T PCR結果：
　　糖尿病對照組和糖尿病鹽水組海馬Nrf2mRNA表達量較正常組降低(P<0.05)；糖尿病對照組與糖尿病鹽水組相比無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，α-硫辛酸干預組和曲克蘆

8、丁干預組的Nrf2mRNA表達量與糖尿病對照組(糖尿病鹽水組)相比均增高(P<0.01，P<0.05)；α-硫辛酸干預組的Nrf2mRNA表達量高于曲克蘆丁組(P<0.01)。
　　4 Western blot結果：
　　4.1細胞Nrf2總蛋白的表達：糖尿病對照組和糖尿病鹽水組的Nrf2總蛋白表達量均低于正常對照組(P<0.01)；糖尿病對照組Nrf2總蛋白表達量和糖尿病鹽水組相比無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；α-硫辛酸干

9、預組和曲克蘆丁干預組的Nrf2總蛋白表達量與糖尿病對照組(糖尿病鹽水組)相比均增高(P<0.01)；α-硫辛酸干預組的Nrf2總蛋白表達量與曲克蘆丁干預組相比無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　4.2細胞Nrf2核蛋白的表達：糖尿病對照組和糖尿病鹽水組的Nrf2核蛋白表達量均低于正常對照組(P<0.01)；糖尿病對照組的Nrf2核蛋白表達量與糖尿病鹽水組相比無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；α-硫辛酸干預組和曲克蘆丁干預組的Nrf2核

10、蛋白表達量與糖尿病對照組(糖尿病鹽水組)相比均增高(P<0.01)；α-硫辛酸干預組的Nrf2核蛋白表達量高于曲克蘆丁干預組(P<0.05)。
　　5 SOD和MDA結果：
　　SOD活力：糖尿病對照組和糖尿病鹽水組SOD活力均弱于正常對照組(P<0.01)；糖尿病鹽水組和糖尿病對照組SOD活力相比無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；α-硫辛酸干預組和曲克蘆丁干預組與糖尿病對照組(糖尿病鹽水組)相比均增強(P<0.01)；α-硫辛

11、酸干預組SOD活力與曲克蘆丁干預組相比無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　MDA含量：糖尿病對照組和糖尿病鹽水組的MDA含量均高于正常對照組(P<0.01)；糖尿病對照組的MDA含量和糖尿病鹽水組相比無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；α-硫辛酸干預組和曲克蘆丁干預組的MDA含量與糖尿病對照組(糖尿病鹽水組)相比均增高(P<0.01)；α-硫辛酸干預組的MDA含量低于曲克蘆丁干預組(P<0.01)。
　　結論：
　　1 ST