丹參、澤瀉對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠的防治作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：臨床資料表明，痰瘀互結(jié)為非酒精性脂肪肝(NAFLD)的重要發(fā)病機(jī)制。丹參具有活血祛瘀之功，澤瀉功能除水濕、消痰濁，兩藥為中醫(yī)臨床治療NAFLD過程中使用頻率較高的中藥。為了觀察其對(duì)NAFLD的防治作用，進(jìn)一步探討其作用機(jī)理，參考相關(guān)文獻(xiàn)運(yùn)用喂飼高脂飼料的方法復(fù)制NAFLD大鼠模型，同時(shí)施加藥物干預(yù)，觀察了丹參、澤瀉及其配伍對(duì)NAFLD大鼠血清中膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游離脂肪酸(FFA)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶

2、(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和血漿中內(nèi)皮素-1(ET-1)、6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)、血栓烷B2(TXB2)含量或活性的影響；運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法觀察了肝組織中組織型纖溶酶原激活物(t-PA)、纖溶酶原激活物抑制劑-1(PAI-1)的表達(dá)變化；運(yùn)用RT-PCR的方法觀察了肝組織過氧化物酶體增殖物激活受體α mRNA(PPAα mRNA)的表達(dá)變化；并運(yùn)用光鏡觀察了肝組織形態(tài)學(xué)的變化。<

3、br>　　方法：選用Wistar大鼠60只，體重160～180g，雄性。大鼠自由飲水進(jìn)食，飼養(yǎng)于18℃～22℃明暗各12小時(shí)的清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。正常喂養(yǎng)一周后，按體重分層隨機(jī)分為6組，每組10只。具體分組情況如下：正常對(duì)照組(簡(jiǎn)稱正常組)、模型對(duì)照組(簡(jiǎn)稱模型組)、丹參水煎劑組(簡(jiǎn)稱丹參組)、澤瀉水煎劑組(簡(jiǎn)稱澤瀉組)、丹參配伍澤瀉水煎劑組(簡(jiǎn)稱丹澤組)、陽(yáng)性藥(東寶肝泰)對(duì)照組(簡(jiǎn)稱對(duì)照組)。采用喂飼高脂飼料(膽固醇1.5％+膽鹽0

4、.5％+豬油10％+普通飼料88％)的方法復(fù)制NAFLD大鼠模型，共造模8周。造模的同時(shí)，各用藥組灌服治療藥或?qū)φ账?，正常組與模型組灌服等量生理鹽水，每天上午灌胃1次，每次用藥體積均按1ml/100g計(jì)算。于最后一次給藥后禁食12h，麻醉狀態(tài)下股動(dòng)脈取血，將血樣低溫離心，分離血清或血漿，檢測(cè)血清中TC、TG、FFA、ALT、AST、SOD、MDA和血漿中ET-1、6-Keto-PGF1α、TXB2的含量或活性變化。同時(shí)迅速剖取肝臟，取肝

5、右葉的部分肝組織，-70℃冰箱冷凍，以備RT-PCR法檢測(cè)PPARmα RNA的表達(dá)變化。并取適宜大小的肝組織置于4％多聚甲醛液中固定，石蠟包埋，切片，運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法觀察肝組織t-PA和PAI-1的表達(dá)變化，運(yùn)用HE染色法觀察肝組織形態(tài)學(xué)的變化。
　　結(jié)果：
　　1各組大鼠血清TC、TG、FFA的含量的變化
　　模型組大鼠血清TC、TG、FFA的含量較正常組明顯升高(P＜0.01)，顯示NAFLD大鼠存在著明顯的

6、脂質(zhì)代謝紊亂。經(jīng)藥物干預(yù)后，各用藥組均能明顯降低大鼠血清TC、TG、FFA的含量(P＜0.01)。其中，丹參組、澤瀉組及丹澤組TC的含量與對(duì)照組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，丹澤組TC的含量低于丹參組和澤瀉組(P＜0.01)，丹參組與澤瀉組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。澤瀉組和丹澤組TG的含量低于對(duì)照組(P＜0.01)，丹參組與對(duì)照組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，丹澤組低于丹參組和澤瀉組(P＜0.01)，澤瀉組低

7、于丹參組(P＜0.01)。丹參組、澤瀉組及丹澤組FFA的含量均低于對(duì)照組(P＜0.01)，丹澤組低于丹參組和澤瀉組(P＜0.01)，丹參組與澤瀉組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2各組大鼠血清ALT、AST活性的變化
　　模型組大鼠血清ALT、AST的活性明顯高于正常組(P＜0.01)，經(jīng)藥物干預(yù)后，各用藥組均能明顯降低NAFLD大鼠血清ALT、AST的活性(P＜0.01)。其中，丹參組、澤瀉組及丹澤組血清ALT

8、的活性均低于對(duì)照組(P＜0.01或P＜0.05)，丹澤組低于丹參組和澤瀉組(P＜0.01)，丹參組與澤瀉組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。丹澤組AST活性低于對(duì)照組和丹參組(P＜0.05或P＜0.01)，澤瀉組與丹澤組、丹參組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3各組大鼠血清SOD活性和MDA含量的變化
　　與正常組比較，模型組大鼠血清SOD的活性明顯降低，MDA的含量明顯升高(P＜0.01)，經(jīng)藥物干預(yù)后，各

9、用藥組與模型組比較，均能增強(qiáng)SOD的活性(P＜0.01)，降低MDA的含量(P＜0.01)。其中，丹參組SOD的活性低于對(duì)照組、MDA含量高于對(duì)照組(P＜0.01)，澤瀉組、丹澤組與對(duì)照組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；丹澤組SOD的活性高于丹參組和澤瀉組(P＜0.01)，MDA的含量低于丹參組和澤瀉組(P＜0.01)；丹參組SOD的活性低于澤瀉組(P＜0.05)，丹參組MDA的含量與澤瀉組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

10、>　　4各組大鼠血漿ET-1、6-Keto-PGF1α和TXB2含量的變化
　　模型組大鼠血漿ET-1含量較正常組明顯升高(P＜0.01)，經(jīng)藥物干預(yù)后，各用藥組大鼠血漿ET-1含量明顯降低(P＜0.01)。其中，丹參組、澤瀉組和丹澤組血漿ET-1含量均低于對(duì)照組(P＜0.05或P＜0.01)，丹澤組低于丹參組和澤瀉組(P＜0.01)，丹參組與澤瀉組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　模型組大鼠血漿6-Keto-PG

11、F1α含量較正常組明顯降低(P＜0.01)，血漿TXB2含量較正常組明顯升高(P＜0.01)。經(jīng)藥物干預(yù)后，各用藥組大鼠血漿6-Keto-PGF1α含量較模型組升高(P＜0.05或P＜0.01)，血漿TXB2含量較模型組降低(P＜0.01)。其中，丹參組、澤瀉組、丹澤組及對(duì)照組血漿6-Keto-PGF1α含量之間兩兩比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；丹澤組血漿TXB2含量低于對(duì)照組、丹參組和澤瀉組(P＜0.05或P＜0.01)，丹參組

12、與澤瀉組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　5各組大鼠肝組織形態(tài)學(xué)的改變
　　光鏡可見：正常組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞呈多邊形圍繞中央靜脈周圍呈放射狀分布，中央靜脈大而壁薄，肝索排列整齊。模型組大鼠肝細(xì)胞伴有中度細(xì)胞水腫及少量的肝細(xì)胞壞死，細(xì)胞核被擠向一邊，胞漿內(nèi)可見大小不等、數(shù)量不一的脂滴空泡，更有甚者脂滴空泡融合，呈現(xiàn)中至重度脂肪變性，但未見明顯的纖維化變化。各治療組大鼠肝細(xì)胞脂肪變均有明顯改善

13、趨勢(shì)，丹澤組脂滴空泡基本消失，丹參組、澤瀉組及對(duì)照組仍可見少量脂滴空泡。
　　6各組大鼠肝組織t-PA、PAI-1表達(dá)的變化
　　模型組大鼠肝組織t-PA表達(dá)較正常組減弱(P＜0.01)，PAI-1表達(dá)較正常組增強(qiáng)(P＜0.01)。經(jīng)藥物干預(yù)后，各用藥組大鼠肝組織t-PA表達(dá)較模型組增強(qiáng)(P＜0.01)，PAI-1表達(dá)較模型組減弱。其中，丹澤組t-PA表達(dá)高于對(duì)照組(P＜0.01)，丹參組與澤瀉組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0

14、.05)。丹澤組PAI-1表達(dá)低于對(duì)照組(P＜0.01)，澤瀉組高于對(duì)照組(P＜0.01)，丹參組和澤瀉組PAI-1表達(dá)高于丹澤組(P＜0.01)，澤瀉組PAI-1表達(dá)高于丹參組(P＜0.05)。
　　7各組大鼠肝組織PPARαmRNA表達(dá)的變化
　　模型組大鼠肝組織PPARαmRNA的表達(dá)明顯低于正常組(P＜0.01)。經(jīng)藥物干預(yù)后，各用藥組PPARαmRNA的表達(dá)均高于模型組(P＜0.01)，。丹澤組PPARαmRNA的

15、表達(dá)高于對(duì)照組、丹參組和澤瀉組(P＜0.01)，澤瀉組低于對(duì)照組(P＜0.01)，丹參組和對(duì)照組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，丹參組高于澤瀉組(P＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　1丹參、澤瀉及其配伍均能降低大鼠血清TC、TG、FFA的含量及ALT和AST的活性，具有良好的調(diào)脂護(hù)肝作用。
　　2丹參、澤瀉及其配伍均能增強(qiáng)大鼠血清SOD的活性，降低MDA的含量，說明其具有清除自由基，增強(qiáng)抗氧化的作用，可以調(diào)節(jié)和改善

16、自由基的代謝。
　　3丹參、澤瀉及其配伍均能降低大鼠血漿ET-1、TXB2的含量，升高血漿6-Keto-PGF1α的含量，從而保護(hù)血管內(nèi)皮，改善肝臟的微循環(huán)。
　　4丹參、澤瀉及其配伍均能明顯改善大鼠肝組織的病變程度，表現(xiàn)為用藥后肝細(xì)胞脂變數(shù)目減少，胞漿內(nèi)脂滴減少。
　　5丹參、澤瀉及其配伍可通過增強(qiáng)大鼠肝組織t-PA的表達(dá)，抑制肝組織PAI-1的表達(dá)，恢復(fù)纖溶系統(tǒng)的平衡狀態(tài)，降低血液粘稠度，阻止血栓形成。