動(dòng)物組織血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的提取純化及其工藝優(yōu)化.pdf

1、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angiotensin Converting Enzyme,ACE;EC.3.4.15.1)是一種二肽羧基的糖蛋白酶,在血壓調(diào)節(jié)中起重要作用。進(jìn)一步深入研究ACE的結(jié)構(gòu)功能、生化性質(zhì)、與其抑制劑結(jié)合作用等需要大量ACE原料,能否獲取大批量高活性的ACE非常關(guān)鍵。本文分別從豬肺和兔肺中分離純化得到ACE,對(duì)各純化步驟的產(chǎn)物進(jìn)行酶活測(cè)定,相對(duì)之前報(bào)道中的方法,提出了新的優(yōu)化的工藝,使獲得大批量高回收率的ACE成為了可能。主

2、要結(jié)果如下:
　　以新鮮豬肺為原材料,用硼酸緩沖液進(jìn)行勻漿后,加入胰蛋白酶與37℃下水浴加熱反應(yīng)一小時(shí)后進(jìn)行離心,分別用1.6mol·L-1和2.6mol·L-1兩種不同濃度的硫酸銨來進(jìn)行分級(jí)沉淀并透析。然后選擇大負(fù)載量的DEAE陰離子交換自裝柱進(jìn)行層析,通過優(yōu)化上樣量、洗脫液鹽濃度、pH和流速,得到最優(yōu)層析條件,獲得了高回收率的酶。經(jīng)測(cè)定所得 ACE的比活力為0.1303U·mg-1,純化倍數(shù)為39.48倍,酶活回收率為59.1

3、4％,其分子量為69kDa,這為后續(xù)的繼續(xù)純化和其他研究工作提供了豐富的原材料,奠定了良好的基礎(chǔ)。
　　參照豬肺ACE的純化方法對(duì)兔肺ACE進(jìn)行分離純化,可以得到比活力為0.1308U·mg-1的兔肺ACE,純化倍數(shù)為31.90倍,酶活回收率為45.20%。
　　對(duì)豬肺ACE和兔肺ACE分別進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行考察,可知兩種ACE的活力與pH和溫度之間的關(guān)系:在偏中性或者弱堿性的環(huán)境下,兩種ACE均表現(xiàn)出較高的活力,其中最適pH