金桔組織培養(yǎng)及其形態(tài)發(fā)生與生理生化變化.pdf

1、本研究以金桔上胚軸為離體培養(yǎng)材料，研究了愈傷組織誘導(dǎo)和器官發(fā)生的適宜條件，建立離體培養(yǎng)再生體系。通過(guò)石蠟切片觀察了離體培養(yǎng)過(guò)程中外植體形態(tài)發(fā)生的變化過(guò)程；用紫外分光光度法和聚丙烯酰胺凝膠電泳分別研究了離體培養(yǎng)過(guò)程中可溶性蛋白含量和幾種同工酶的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：6-BA和NAA適當(dāng)濃度配比對(duì)離體誘導(dǎo)和分化有促進(jìn)作用，愈傷組織誘導(dǎo)以6-BA1.5mg/L+NAA1.0mg/L為佳，第24d愈傷組織增長(zhǎng)20.3倍。愈傷組織分化以6-BA1.

2、5mg/L+NAA0.5mg/L為佳，分化率為75％。生根培養(yǎng)時(shí)，較高的NAA濃度(1mg/L)易產(chǎn)生愈傷組織，較低濃度無(wú)機(jī)鹽有利于生根，以1/2MS+NAA0.5mg/L較好，生根率為95％。金桔上胚軸離體再生為器官發(fā)生型，芽體多由愈傷組織內(nèi)部形成，少數(shù)由愈傷組織表面發(fā)生。過(guò)氧化物酶(POD)中POD1與誘導(dǎo)過(guò)程的啟動(dòng)有關(guān)；POD2、POD5和POD6在誘導(dǎo)第12d天出現(xiàn)，是愈傷組織快速增殖的標(biāo)志；POD4在一開(kāi)始誘導(dǎo)時(shí)消失，到分化培

3、養(yǎng)第24d再現(xiàn)，與芽的形成有關(guān)。超氧化物歧化酶(SOD)中SOD4在愈傷組織誘導(dǎo)第12d消失，是愈傷組織快速增殖的標(biāo)志；SOD2和SOD7均在分化第24d出現(xiàn)，是形成芽的標(biāo)志。過(guò)氧化氫酶(CAT)只出現(xiàn)一條酶帶，其穩(wěn)定表達(dá)，對(duì)維持細(xì)胞代謝環(huán)境的穩(wěn)定有重要作用。蘋果酸脫氫酶(MDH)在誘導(dǎo)階段逐漸變強(qiáng)，在出芽前后有一個(gè)波動(dòng)；MDH4在誘導(dǎo)第2d出現(xiàn)，到分化第24d后消失，可能為離體培養(yǎng)中特殊生理代謝所需?？扇苄缘鞍缀吭谟鷤M織誘導(dǎo)階段，