miRNA-331在大腸癌中生物學功能研究.pdf

1、目的：
　　將人大腸癌細胞株HCT116進行細胞培養(yǎng)，再進行miRNA-331mimics轉染，采用平板克隆形成實驗、MTT法和Transwell小室實驗檢測miRNA-331對人大腸癌細胞 HCT116的增殖能力、克隆形成、遷移能力、侵襲能力的影響。闡明miRNA-331對大腸癌的發(fā)生、發(fā)展的影響，探討miRNA-331作為腫瘤基因標記物對大腸癌診斷的價值，為大腸癌的早期診斷、早期治療提供理論和依據(jù)。
　　方法：
　

2、　1、選取中國科學技術大學生命科學院分子病理實驗室提供的大腸癌細胞株HCT116進行細胞培養(yǎng)。
　　2、將 HCT116細胞進行 miRNA-331mimics轉染，設實驗組（轉染miRNA-331mimics組）和對照組（negative control，NC）。
　　3、應用平板克隆形成實驗觀察轉染miRNA-331mimics后HCT116細胞集落形成情況。
　　4、采用MTT法觀察轉染miRNA-331mimi

3、cs后第1天、第2天、第3天、第4天、第5天分別檢測5個同一時段的OD值，并繪制細胞的生長曲線。
　　5、通過Transwell小室實驗觀察HCT116細胞轉染miRNA-331mimics后其遷移能力及侵襲能力的變化。
　　6、采用SPSS20.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學對比分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示，兩組間配對樣本采用配對t檢驗，兩組間獨立樣本采用非配對t檢驗，均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：

4、r>　　1、在平板克隆形成實驗中，兩組間細胞集落形成的數(shù)量和體積均有明顯差異，實驗組細胞集落形成數(shù)量較對照組減少，集落形成體積明顯小于對照組。
　　2、HCT116細胞轉染miRNA-331mimics后第1天、2天、3天、4天、5天，采用MTT比色分析法檢測OD值，實驗組和對照組結果分別為第1天：（0.08±0.07、0.10±0.08），（t=-3.42,P<0.05）；第2天：（0.11±0.01、0.16±0.04），（t

5、=-3.33,P<0.05）；第3天：（0.39±0.10、0.62±0.21），（t=-2.49,P<0.05）；第4天：（0.75±0.10、1.20±1.94），（t=-5.05,P<0.05）；第5天：（1.13±0.23、2.23±0.30），（t=-7.19,P<0.05）。通過對比發(fā)現(xiàn)隨著HCT116細胞中miRNA-331mimics的含量增多可抑制細胞的增殖，結果有統(tǒng)計學意義。
　　3、HCT116細胞轉染miR

6、NA-331mimics后，通過Transwell實驗觀察發(fā)現(xiàn)實驗組細胞進入下方培養(yǎng)液數(shù)量減少，表明轉染后的HCT116細胞的遷移能力減弱。
　　4、HCT116細胞轉染miRNA-331mimics后，通過Transwell實驗觀察實驗組和對照組均未發(fā)現(xiàn)細胞進入下方培養(yǎng)液中，兩組結果為陰性，表明轉染后的 HCT116細胞的侵襲能力無明顯變化。
　　結論：
　　miRNA-331mimics有抑制大腸癌HCT116細胞