大腸癌相關(guān)抗原基因及大腸癌相關(guān)抗原的實驗研究.pdf

1、目的：應(yīng)用生物信息學對大腸癌相關(guān)抗原基因CRC-L-10的基因結(jié)構(gòu)和生物學功能進行預測，RT-PCR鑒定CRC-L-10的表達譜；應(yīng)用蛋白組學技術(shù)結(jié)合生物信息學方法鑒定、分析抗大腸癌單克隆抗體Hb3識別的相關(guān)抗原Ca-Hb3。 方法：應(yīng)用美國國家生物信息中心(NCBI)的核酸數(shù)據(jù)庫，EST數(shù)據(jù)庫和相應(yīng)軟件分析進行生物信息學分析。提取細胞總RNA，采用半定量RT-PCR擴增CRC-L-10，凝膠電泳后對電泳圖進行灰度掃描。提取HR

2、T-18細胞總蛋白，經(jīng)SDS-PAGE、Western blot鑒定出與Hb3特異結(jié)合的PAGE膠條帶，目的條帶胰酶消化后，采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜進行鑒定。 結(jié)果：大腸癌相關(guān)基因CRC-L-10定位于15q25.2，最長開放閱讀框為579bp，編碼192個氨基酸，廣泛表達于許多正常組織如骨、肝、胰、心臟等，但在皮膚癌、腎癌、胃癌、肝癌等10種腫瘤組織中表達明顯上調(diào)，而在相應(yīng)正常組織中低表達。RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)CRC-L-10

3、在腫瘤細胞株的表達與正常細胞株比較，均無顯著性差異(P>O.05)。 大腸癌相關(guān)抗原Ca-Hb3經(jīng)質(zhì)譜鑒定為CKAP4相似蛋白，分子量62.02KD。該蛋白有1個疏水區(qū)、1個跨膜區(qū)、5個卷曲螺旋結(jié)構(gòu)、4個糖基化位點和49個磷酸化位點，屬于a結(jié)構(gòu)類蛋白，與P63蛋白序列高度同源。而P63的亞型DeltaNp63 a被認為是個潛在的致癌基因，表達特性與Ca-Hb3相似。 結(jié)論： 1．CRC-L-10經(jīng)生物信息學分析為