大腸癌發(fā)生發(fā)展及轉移相關分子的篩選和生物學功能研究.pdf

1、本課題旨在通過差異蛋白質組學的方法，尋找與大腸癌發(fā)生發(fā)展及轉移相關的蛋白質分子，研究這些蛋白質與大腸癌發(fā)生發(fā)展的關系。近期的研究表明，腫瘤的進展和淋巴結轉移程度都是決定患者預后的重要因素。尋找與大腸癌發(fā)生發(fā)展及轉移相關的分子，對于揭示大腸癌發(fā)生發(fā)展的分子機理，以及預測患者的預后都具有非常重要的意義。
　　 本課題收集了15例臨床組織標本，通過雙向電泳技術對組織總蛋白進行分離分析，并對差異表達蛋白點進行MALDI-TOF-MS分析

2、，得到了33個相關分子。其中FHC的表達水平隨腫瘤轉移的發(fā)生進展而下降，而UCHL1的表達水平則隨轉移的發(fā)生進展而上升。隨后，我們通過Western blot和免疫組化的方法對這一結果進行了研究。
　　 免疫組化的實驗結果顯示，UCHL1高表達與腫瘤T分期及淋巴結轉移具有顯著相關性。UCHLl是泛素水解酶家族的重要成員，它參與調控細胞內很多重要代謝活動。我們的研究發(fā)現(xiàn)，UCHL1高表達能夠促進HCT8細胞在體外的增殖和遷移能力。

3、而其突變體C90S則失去了這種能力，這實驗結果說明，UCHL1的泛素水解酶功能對于其促進生長、轉移的功能是必不可少的。我們的研究還發(fā)現(xiàn)，LICHL1可能是通過激活β-catenin/TCF4通路來發(fā)揮其功能的。免疫熒光實驗的結果顯示，在UCHL1高表達的細胞中，β-catenin的表達量也有所提高，兩者存在共定位現(xiàn)象，并且主要定位于細胞核。另外，UCHL1的高表達能夠使β-catenin的蛋白量呈現(xiàn)高水平，而mRNA的表達量卻基本不變。

4、同時，UCHL1能夠促進β-catenin/TCF4通路下游調控基因的表達。這說明，UCHL1可能是通過降低β-catenin的泛素化水平，使其在核內堆積，從而激活β-catenin/TCF4通路來發(fā)揮功能的。
　　 另外，免疫組化結果顯示，F(xiàn)HC在大腸癌組織中的表達量有所下降，且其表達下降與腫瘤的轉移具有明顯的相關性。FHC在鐵代謝途徑中發(fā)揮重要的作用，具有貯存和釋放鐵離子的功能。我們初步研究了FHC的生物學功能，發(fā)現(xiàn)FHC高