pitx3和nurr1基因在不同年齡及帕金森病移植大鼠有關(guān)腦區(qū)表達(dá)變化及意義.pdf

1、目的：1、探討正常不同年齡SD大鼠與帕金森病(PD)模型大鼠有關(guān)腦區(qū)pitx3、nurr1基因的表達(dá)變化；2、探討聯(lián)合膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)條件下，中腦源神經(jīng)干細(xì)胞(mNSCs)在體外培養(yǎng)和移植治療PD大鼠模型移植區(qū)的增殖、分化能力和表達(dá)Pitx和Nurr1的變化。 方法：1、使用RT-PCR、Westernblot、免疫組化和免疫熒光方法檢測了正常不同年齡SD大鼠、PD大鼠和mNSCs移植治療PD大鼠有關(guān)腦區(qū)pi

2、tx3和nurr1基因的表達(dá)；2、立體定位下，大鼠左側(cè)黑質(zhì)致密部(SNc)和腹側(cè)被蓋區(qū)(VTA)注射6-OHDA制備PD模型；3、取E14.5d大鼠中腦組織體外培養(yǎng)原代mNSCs，增殖培養(yǎng)傳三代后進(jìn)行分化實驗和移植實驗；4、大鼠的旋轉(zhuǎn)行為學(xué)檢測。 結(jié)果：1、RT-PCR、Westernblot檢測顯示，pitx3、nurr1基因在各年齡組大鼠中腦、大腦皮質(zhì)、海馬、紋狀體、嗅球和下丘腦均有表達(dá)，其中在海馬和中腦表達(dá)較高；2、在各年

3、齡組中新生組表達(dá)最高，以后隨著年齡的增長其表達(dá)呈下調(diào)趨勢；3、免疫熒光檢測E16.5d組和新生組的中腦、大腦皮質(zhì)、海馬、紋狀體、嗅球和下丘腦區(qū)觀察到有大量Pitx3或Nurr1單標(biāo)細(xì)胞；在中腦、海馬和下丘腦區(qū)觀察到大量Pitx3/TH或Nurr1/TH雙標(biāo)細(xì)胞；4、PD大鼠病變側(cè)中腦的Pitx3和Nurr1表達(dá)明顯下降，而其它區(qū)域與正常組比較未見明顯變化；5、TH免疫熒光顯示PD大鼠忠側(cè)TH的表達(dá)明顯下降；6、mNSCs聯(lián)合GDNF體外

4、培養(yǎng)后，克隆球直徑增大，數(shù)量增多，分化的神經(jīng)元中TH、Pitx3和Nurr1表達(dá)增加；7、mNSCs單獨移植組和mNSCs聯(lián)合GDNF移植治療組在移植后四周、八周移植區(qū)均有Pitx3、Nurr1和TH表達(dá)，mNSCs單獨移植組少見表達(dá)Pitx3和Nurr1；8、Westernblot檢測顯示聯(lián)合移植組移植區(qū)TH表達(dá)量高于單獨移植組，其中聯(lián)合移植四周組表達(dá)量最高；9、各移植組大鼠旋轉(zhuǎn)行為未見明顯改善。 結(jié)論：1、pitx3、nur

5、r1基因的表達(dá)不僅與中腦DA能神經(jīng)元，而且可能與幾茶酚胺類神經(jīng)元的發(fā)育和生存維持有關(guān)；2、pitx3、nurr1基因在多個腦區(qū)呈廣泛性表達(dá)，部分在非TH陽性神經(jīng)元也表達(dá)，說明其調(diào)控作用足復(fù)雜的。3、老年期pitx3、nurr1基因表達(dá)下降可能與腦老化和神經(jīng)退行性變疾病，如PD和老年性癡呆等有關(guān)；4、PD大鼠模型患側(cè)中腦的TH、Pitx3和Nurr1表達(dá)明顯下降與DA能神經(jīng)元的凋亡直接相關(guān)；推測pitx3、nurr1基因缺陷或表達(dá)下降可能