蒲葵子活性成分及質(zhì)量控制研究.pdf

1、癌癥嚴(yán)重威脅著人類的健康和生命安全，目前發(fā)病率和死亡率均呈逐年上升趨勢。因此，研究高效、低毒的抗癌藥物具有重要意義，而從天然藥物中發(fā)掘抗癌藥物正是目前研究熱點(diǎn)之一。
　　 蒲葵子為棕櫚科植物蒲葵Livistona chinensis (Jacq.) R. Br.的種子，福建民間廣泛用其治療各種癌癥，現(xiàn)代藥理學(xué)研究也證實(shí)其抗癌療效顯著。然而，對蒲葵子的研究較少，僅見化學(xué)成分、粗提物的抗癌活性研究。因此，有必要對蒲葵子進(jìn)行深入的藥學(xué)

2、相關(guān)研究，為其抗癌藥用開發(fā)提供基礎(chǔ)和依據(jù)。鑒于此，本文首先進(jìn)行蒲葵子的生藥學(xué)研究；研究各提取部位、組分的抗癌活性；采用HPLC-DPPH 法研究蒲葵子提取物的抗氧化活性，篩選其中的高效抗氧化活性成分峰，并采用液質(zhì)聯(lián)用鑒定它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)；對蒲葵子進(jìn)行植物化學(xué)細(xì)分工作，并對獲得的化合物進(jìn)行體外抗癌活性篩選及動(dòng)物移植瘤體內(nèi)抗腫瘤驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)；考察蒲葵子主要活性成分的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)行為；建立評價(jià)蒲葵子藥材質(zhì)量的含量測定、指紋圖譜方法等。其主要研究內(nèi)

3、容及學(xué)術(shù)貢獻(xiàn)如下：
　　 1、對蒲葵子藥材進(jìn)行了本草考證，包括原植物形態(tài)、分布地域、藥材性狀、顯微特征、理化鑒定和含量測定等研究，為蒲葵子的藥用提供生藥學(xué)資料。
　　 2、對蒲葵子進(jìn)行初步提取、分離，得到不同極性提取部位；采用體外人腫瘤細(xì)胞篩選各部位抗腫瘤活性，證實(shí)乙酸乙酯、正丁醇部位抗癌活性較好，并采用移植性實(shí)體瘤來驗(yàn)證其體內(nèi)抑癌活性；這為后續(xù)的以活性為導(dǎo)向的植物化學(xué)細(xì)分工作提供了依據(jù)。
　　 3、建立HPLC

4、－DPPH抗氧化活性篩選法，用于天然產(chǎn)物的抗氧化活性成分高效篩選研究。并應(yīng)用該法首次對蒲葵子中的抗氧化活性成分進(jìn)行了高通量篩選，證實(shí)蒲葵子中有7個(gè)主要成分具有強(qiáng)的抗氧化活性。本研究揭示了蒲葵子的抗氧化活性作用，并首次明確了主要的抗氧化活性成分峰，也為天然產(chǎn)物的抗氧化活性成分篩選提供了可行手段。
　　 4、基于HPLC－DPPH的抗氧化活性篩選結(jié)果，采用液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS）分析了主要的抗氧化活性成分峰，解析其質(zhì)譜碎片，推

5、導(dǎo)其裂解規(guī)律，初步鑒定了總提物中的6個(gè)主要抗氧化活性成分，其中有5個(gè)成分為首次從該植物中發(fā)現(xiàn)。
　　 5、對蒲葵子提取物進(jìn)行植物化學(xué)細(xì)分研究，分離得到了25個(gè)化合物。利用1H-NMR，13C-NMR，Mass及IR等光譜分析，鑒定了18個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)；8個(gè)化合物為首次從蒲葵子中分離得到，其中3個(gè)化合物為首次從該科植物中分離得到。
　　 6、對分離得到的組分及化合物進(jìn)行體外抗癌活性篩選，證實(shí)苜蓿素具有較好的抑癌細(xì)胞生長活性

6、；通過AO/EB熒光染色、DNA斷裂瓊脂糖凝膠電泳分析、免疫組化染色法檢測CDX2的表達(dá)、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期、Western Blot分析Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)，從而研究苜蓿素對細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用，并進(jìn)行體內(nèi)抗腫瘤活性研究，驗(yàn)證了其體內(nèi)抑癌活性。本研究揭示苜蓿素可能是蒲葵子的抗癌作用主要成分之一。
　　 7、建立HPLC法檢測大鼠血漿中苜蓿素濃度的方法，首次研究了口服苜蓿素在大鼠體內(nèi)的血漿藥代動(dòng)力學(xué)行為。本研究為探明抗癌

7、活性成分苜蓿素的體內(nèi)過程提供了參考。
　　 8、以分離得到的6個(gè)主要化合物作為含量測定指標(biāo)，建立同時(shí)測定6個(gè)成分的HPLC-UV方法，并分析了10個(gè)不同產(chǎn)地蒲葵子中的6個(gè)指標(biāo)性成分的含量，為該草藥的質(zhì)量控制提供了的定量評價(jià)方法。
　　 9、建立蒲葵子的HPLC-UV指紋圖譜分析方法，考察了方法的精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性，并考察了10批多個(gè)產(chǎn)地的蒲葵子藥材指紋圖譜一致性，本研究為蒲葵子藥材的鑒別及質(zhì)量控制提供了較全面的定性評