蒲葵子抗癌有效部位的毒理學實驗研究.pdf

1、目的：從蒲葵子的95％乙醇提取液的乙酸乙酯部位純化出抗癌有效部位，對其進行毒理學研究，確定毒性范圍與毒副作用，為進一步臨床應用提供實驗依據(jù)。
　　方法：1.將蒲葵子用95%乙醇進行回流提取后，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進行部位分離。2.分離后幾大部位提取物采用MTT法進行初步抗癌有效部位體外細胞藥效篩選，并確定有效部位，以進行進一步純化。3.對確定的有效部位乙酸乙酯部位，利用聚酰胺柱層析法對其進行純化，得到黃酮類。4.急性毒性

2、實驗，選用健康昆明種小鼠20只，雌雄各半，以最大濃度最大給藥體積（11g/kg體重）灌胃后，連續(xù)觀察兩周，記錄中毒以及死亡情況。5.長期毒性實驗，健康SD大鼠120只，按體重隨機分為4組（每組30只，雌雄各半），劑量組給藥劑量分別為0.325、0.65、1.30g/kg體重，空白組給予純凈水，經(jīng)口灌胃給藥13周，13周后每組均處死2/3大鼠進行血液、生化、病理等指標測定。剩余大鼠于停藥4周后處死，方法及觀察指標同前。6.遺傳毒性試驗，包

3、括微量波動試驗和小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗。微量波動試驗，受試物分別設500，50，5，0.5，0.025μg/ml五個不同濃度，同時設立未處理對照、陰性對照和陽性對照。采用96孔板微量滴定法，在加S9和不加S9條件下進行，經(jīng)37℃培養(yǎng)5天后觀察結果，實驗重復兩次。小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗，健康昆明種小鼠60只，隨機分為6組（每組10只，雌雄各半），設11、5.5、2.75、1.38 g/kg體重四個劑量組，同時設立陽性對照組（環(huán)

4、磷酰胺）和空白對照組(純凈水)，灌胃給藥，給藥組和空白對照組每天給藥一次,連續(xù)給藥4天，第5天收集骨髓細胞，陽性對照組為腹腔注射環(huán)磷酰胺一次，給藥后24小時收集骨髓細胞，涂片、染色、觀察結果。
　　結果：1.本實驗用一般中藥化學提取方法，對蒲葵子有效成分進行提取與粗分，用MTT體外藥效篩選結果表明，乙酸乙酯效果明顯，即采用聚酰胺層析法，得到黃酮類。2.黃酮類進行臨床前安全性評價結果：①急性毒性實驗。有效成分毒性較小，MTD大于11

5、g/kg。②長期毒性實驗。給藥13周后，各組織器官無異常改變，血液檢查與生化指標正常。停藥4周后，各組織器官亦正常。大體解剖未發(fā)現(xiàn)異常。③遺傳毒性實驗：微量波動試驗，各濃度受試物無論加S9或不加S9，各板中變色孔數(shù)經(jīng)X2檢驗，與陰性對照組相比，無顯著性差異（P>0.05）；與陽性對照組相比，有顯著性差異（P<0.001）。小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗，雌、雄各給藥組與陰性對照組相比，無顯著性差異（P>0.05）；與陽性對照組相比，有顯著