蒲葵子抗氧化及保肝活性研究.pdf

1、肝臟是生物體內最大的腺體，具有分泌、生物轉化等多種生理功能，但損傷因素如病毒、藥物、酒精等可導致其功能障礙，引起肝組織變性、壞死。長期處于肝損傷而缺乏有效的治療，往往容易病情惡化，甚至導致肝硬化、肝癌。目前臨床上常用的西藥甘草酸二銨、聯苯雙酯、還原型谷胱甘肽等，雖有一定作用，但遠期療效不穩(wěn)定，部分藥品價格不菲，不良反應漸有報道，限制了臨床應用，故中醫(yī)藥防治肝損傷具有重要的臨床意義，也越來越受到重視。
　　中藥蒲葵子為廣東省常見植物

2、棕櫚科蒲葵樹(Livistona chinensis R.Br.)的種子，在廣東、廣西、福建和臺灣等地民間應用廣泛，用于治療肝癌和肝炎。文獻報道蒲葵子的水提物、乙醇提取物和乙酸乙酯提取物均有一定的抗癌活性，能夠抑制人肝癌細胞株（HepG2和BEL-7402）等多種癌細胞增殖;蒲葵子的黃酮類化合物以及酚類成分具有抗氧化活性。眾所周知，活性氧(ROS)累積能導致肝臟損傷，因此，蒲葵子可能具有一定的抗氧化和保肝活性。
　　目的:

3、　　通過體內與體外實驗，研究蒲葵子不同極性部位的抗氧化和保肝作用，探究其可能的作用機制。
　　方法:
　　1.通過清除DPPH-自由基和超氧陰離子自由基（O2-）實驗考察蒲葵子乙醇提取物中最佳抗氧化活性部位。
　　2.MTT法測定不同濃度蒲葵子乙酸乙酯部位(ethyl acetate fraction separatedfrom the fruit of Livistona chinensis，EFLC)對人正常肝細胞

4、LO2的細胞毒性;MTT法聯合流式細胞儀和細胞核染色劑Hoechst3342考察EFLC對H2O2誘導的LO2細胞氧化應激損傷的保護作用;試劑盒法檢測細胞中丙二醛(MDA)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)含量。
　　3.BABL/C小鼠連續(xù)灌胃一周EFLC預防給藥7天后尾靜脈注射ConA誘導小鼠急性肝損傷模型，測定小鼠血清中谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)含量和肝臟組織勻漿中MDA、T

5、-SOD以及GSH-PX含量，H&E染色觀察小鼠肝臟的組織學變化，探究EFLC對急性肝損傷的保護作用;WesternBlot法檢測小鼠肝臟組織的Caspase-3，Caspase-8，Bax，Bcl-2，Fas和Fasl蛋白表達水平。
　　結果:
　　清除DPPH-自由基和超氧陰離子自由基(O2-)體外實驗，結果顯示EFLC抗氧化能力最佳;對于H2O2誘導的細胞氧化應激損傷，EFLC預防給藥能夠減少LO2細胞凋亡，升高抗氧化

6、酶表達水平;對于ConA誘導小鼠急性肝損傷，EFLC預防給藥（連續(xù)灌胃一周）能夠顯著降小鼠血清的ALT和AST水平，升高肝臟勻漿中的GSH-PX和T-SOD表達水平，降低MDA值，減輕ConA引起的小鼠的肝臟組織學傷害;實驗結果顯示EFLC具有保肝和抗氧化作用，其機理可能與EFLC能夠下調ConA引起的肝損傷的小鼠肝臟組織中的Bax、Caspase-3、Caspase-8、Fas和FasL蛋白表達水平，上調小鼠肝臟組織中的Bcl-2蛋白

7、表達水平有關。
　　結論:
　　1.在蒲葵子不同極性提取物中，EFLC抗氧化活性最佳。
　　2.EFLC對H2O2誘導的LO2細胞氧化應激損傷具有保護作用。
　　3.EFLC對ConA誘導的急性肝損傷具有保護保護作用，其機制可能與抗氧化損傷和下調ConA引起的肝損傷的小鼠肝臟組織中的凋亡相關蛋白Bax、Caspase-3、Caspase-8、Fas和FasL蛋白表達水平，上調小鼠肝臟組織中的抗凋亡蛋白Bcl-2蛋