白附子炮制后新增化學(xué)成分的研究.pdf

1、目的：本研究為河南省重大科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目“中藥飲片加工炮制規(guī)范化研究”的子課題“禹白附飲片加工炮制規(guī)范化研究”的后續(xù)課題。自附予藥材來源限定于河南禹州市主產(chǎn)的天南星科植物獨(dú)角蓮D,honium gfganteumEngl干燥塊莖。比較白附于生、制品在紫外光譜及l(fā)IPLc圖譜上的區(qū)別，分離鑒定白附于炮制后新增成分，建立新增成分的定性定量方法，考察白附子不同炮制工藝對新增成分含量的影響，研究白附子抗腫瘤作用，探討自附予不同炮制品對酪氨酸酶活

2、性的影響。為優(yōu)化炮制工藝研究提供科學(xué)依據(jù)，為利用制白附于抗癌作用開發(fā)新的藥物以及中醫(yī)臨床用藥安全有效提供應(yīng)用基礎(chǔ)。
　　 方法：用紫外譜線組法比較白附予生、制品不同溶劑部位紫外圖譜峰位和峰值的變化；采用。FIPLc法比較白附予炮制前后化學(xué)成分的變化，確定新增化學(xué)成分檢測條件；采用不同極性溶劑提取，HPLc檢測新增成分存在的溶劑部位，薄層色譜法確定新增化學(xué)成分定性條件及分離條件，硅膠柱層析法和制各液相法分離純化新增化學(xué)成分，運(yùn)用現(xiàn)

3、代波譜分析方法(UV、IR、0HNMR、”CNMR及MS)和理化方法確定單體化臺物的結(jié)構(gòu)；采用。Molish反應(yīng)檢識白附于生品中的糖苷，HI'Lc-ELSD法分析白附子炮制前后低聚糖的種類及含量變化，模擬白附于炮制條件進(jìn)行試驗(yàn)，研究制白附子中新增成分生成途徑；采用HPLc法對不同時(shí)間及不同白礬用量加熱炮制的白附子制品中的新增成分進(jìn)行了含量測定，考察藥典法常壓制白附子炮制工藝條件對新增成分含量的影響；考察姜礬輔料的用量、加壓時(shí)間、加壓壓力

4、、加壓溫度等加壓炮制工藝條件對新增成分含量的影響；采用HPI。C法建立測定白附子中新增成分類似結(jié)構(gòu)化臺物含量的方法，考察炮制對該化臺物含量的影響；采用體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)方法，觀察白附于生品、制品水煎劑和醇提物對s180小鼠的抑瘤作用以及對8180小鼠免疫器官的影響；采用酶活性測定法，測定白附子不同炮制品對酪氨酸酶活性的抑制率。
　　 結(jié)果；白附予炮制后，其紫外譜線組發(fā)生顯著變化，各提取部位炮制后臺量均有明顯下降，氯仿及水部位下降與乙

5、醇部位相比更為顯著，藥典制品和加壓制品紫外譜線組相似；白附予炮制后產(chǎn)生了新增化學(xué)成分且其含量相對較高；新增化學(xué)成分是5一羥甲基糠醛(5一Hivil’)，其結(jié)構(gòu)類似物質(zhì)是雙『5一甲?；豢坊?一醚；生品中低聚糖類主要有果糖、葡萄糖、蔗糖等，蔗糖在白附子炮制條件下能轉(zhuǎn)化成5一HIVIF；不同炮制品中5椰含量在一定范圍內(nèi)隨加熱時(shí)間的延長而增加，隨著輔料白礬用量的增加而增加，加壓制白附予中5一Hivil’含量在一定范國內(nèi)隨加壓溫度升高而降低，隨

6、白礬用量的增加先升高后降低，以9％白礬為最高，不加姜制品大于加姜制品；白附子炮制前后雙(5-甲?；坊?醚含量生品＜加壓法制品＜藥典法制品；白附子抗腫瘤實(shí)驗(yàn)，水煎劑：與對照組比較，環(huán)磷酰胺組和生品組抑瘤率分別達(dá)到52.86％、26.43％，均有顯著性差異(P＜0.05)，制品對胸腺和脾臟的作用強(qiáng)于生品。醇提物：與對照組相比較，生品高劑量組抑瘤率41 24％，具有顯著性差異(p＜0.05)，制品醇提物提高小鼠免疫器官重量，制品醇提物各劑量

7、組對S180腹水瘤小鼠有生命延長作用；白附子不同炮制品對酪氨酸酶抑制率：藥典法炮制品＜加壓炮制品＜生品。
　　 結(jié)論：紫外譜線組法簡便，準(zhǔn)確靈敏，可用于鑒別白附子生品與制品；白附子炮制后產(chǎn)生了新增化學(xué)成分5-羥甲基糠醛(5-HMY)，得到的其結(jié)構(gòu)類似物質(zhì)為雙[5-甲?；?糠基]-醚，兩個(gè)化臺物均為首次從白附子制品中分離得到；炮制品中的5-HMF可能是生品中的蔗糖在炮制過程中轉(zhuǎn)化而成的；白附子藥典法不同炮制品中5-HMF含量與加熱

8、時(shí)間和輔料白礬用量呈正相關(guān)；姜礬輔料的用量、加壓時(shí)問、加壓壓力、加壓溫度等加壓炮制工藝條件對5-HMF含量均有一定影響，加壓炮制能明顯提高5-HMF的含量；炮制能提高白附子中的雙(5-甲?；坊?醚含量；白附子炮制前后水煎劑和醇提物均有一定的抗腫瘤作用，制品水煎劑和醇提物有一定的增強(qiáng)小鼠機(jī)體免疫功能作用，白附子生品醇提物無生命延長作用，而制品醇提物延長小鼠生存時(shí)間，臨床應(yīng)用宣選用制品；白附子不同炮制品對酪氨酸酶均有一定的抑制作用，炮制對