2,3-二氨基丙酸：蘇云金芽胞桿菌中Zwittermicin A合成的直接前體物之一.pdf

1、分類號(hào):華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文2，3一二氨基丙酸:蘇云金芽胞桿菌中Zw1ttermicinA合成的直接前體物之一Dia而noProPionate:oneofthePrecursorsfortheBiosynthesisofZwitter而einAinBaeillusThuringiensisStrainYBT1520研究生:宋春旭指導(dǎo)教師:孫明教授專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)獲得學(xué)位名稱:理學(xué)碩士研究方向:芽胞桿菌分子生物學(xué)提交論文時(shí)間

2、:2008年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院二00八年六月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩卜學(xué)位論文20082.2.1.2.2蘇云金芽胞桿菌總DNA的抽提...................................……192.2.1.3重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化.......................................................................……192.2.1.3.1大腸桿菌CaC12法感受態(tài)制備

3、及常規(guī)轉(zhuǎn)化..................……1922.1.3.2蘇云金芽胞桿菌的電轉(zhuǎn)化..................................……，....……202.2.1.4PCR擴(kuò)增....................................................................................……202.2.2SDS一PAGE蛋白質(zhì)電泳...........

4、...........................................................……202.2.2.1菌體蛋白樣品的制備...............................................................……202.2.2.2SDS一PAGE凝膠的制備......................................................

5、......……212.2.2.3電泳、染色及脫色...................................................................……212.2.3ZwA的分離與檢測(cè).............................................................................……212.2.3.1ZwA活性平板檢測(cè).............

6、......................................................……212.2.3.2ZwA的高效液相色譜檢測(cè).......................................................……212.2.4蛋白質(zhì)的預(yù)測(cè)、表達(dá)、純化與活性檢測(cè)........................................……222.2.4.1腺普酞化功能域的預(yù)測(cè).

7、..........................................................……222.2.4.2腺普酞化功能域的超量表達(dá)與純化.......................................……222.2.4.2.1腺昔酞化功能域的擴(kuò)增.................................................……222.2.4.2.2腺普酞化功能域重組質(zhì)粒的

8、構(gòu)建.................................……222.2.4.2.3腺普酞化功能域重組菌株的超量表達(dá)及其純化.........……222.2.4.2.4月泉普酞化功能域?qū)?，3一二氨基丙酸的特異性檢測(cè)......……233結(jié)果與分析......................................................................................……，.

9、...............……243.1前體物2，3一二氨基丙酸................................................................................……243.1.1前體物2，3一二氨基丙酸的合成途徑假設(shè)..........................................……243.1.2前體物2，3一二氨基丙酸合成基因ZwA從的插入突變研究

10、............……253.1.2.12”性扒的插入突變...................................................................……253.1.2.22，3一二氨基丙酸體外喂養(yǎng)ZwA扒一突變體................................……273.1.2.3體內(nèi)回復(fù)突變ZwA扒一突變體................................

11、..................……293.2月泉營(yíng)酞化功能域的預(yù)測(cè)、表達(dá)與活性檢測(cè)...............................................……313.2.1月泉營(yíng)酞化功能域的預(yù)測(cè)..……，............................................................……313.2.2月泉營(yíng)酞化功能域的表達(dá)........................

12、.............................................……333.2.2.1月泉普酞化功能域的擴(kuò)增...........................................................……333.2.2.2月泉普酞化功能域重組質(zhì)粒的構(gòu)建...........................................……343.2.2.3月泉普酞化功能域重組菌株的超

13、量表達(dá)...................................……343.2.2.4月泉普酚化功能域?qū)?，3一二氨基丙酸的特異性檢測(cè)結(jié)果........……374討論.............……，.....................................................................................................……414.1zwA前體物