毒死蜱對凡納濱對蝦的毒性效應(yīng)研究.pdf

1、為了對毒死蜱的毒性做出安全性評價,本文以凡納濱對蝦為實驗動物,研究了毒死蜱對凡納濱對蝦幼蝦(4.88±0.11g)和成蝦(10.27±0.41g)的急性毒性。實驗結(jié)果顯示,毒死蜱濃度越高,死亡時間出現(xiàn)越早;毒死蜱對凡納濱對蝦幼蝦的24hLC50、48hLC50、72hLC50和96hLC50分別為3.948μg/L、2.695μg/L、1.320μg/L和0.758μg/L,安全濃度為0.0758μg/L;毒死蜱對凡納濱對蝦成蝦的24h

2、LC50、48h LC50、72hLC50和96hLC50分別為5.743μg/L、3.688μg/L、2.437μg/L和1.951μg/L,安全濃度為0.195μg/L。按照農(nóng)藥毒性分級標準,毒死蜱對凡納濱對蝦屬劇毒性農(nóng)藥。另外,和幼蝦相比,成蝦對毒死蜱的敏感性較低。
　　為進一步評價養(yǎng)殖水環(huán)境中毒死蜱對凡納濱對蝦生存的危害性,本研究開展了毒死蜱脅迫下白斑綜合征病毒(WSSV)對凡納濱對蝦致死實驗,分析了毒死蜱脅迫下WSSV在

3、凡納濱對蝦鰓組織增殖規(guī)律和肌肉組織乙酰膽堿酯酶活性變化情況。在上述急性毒性實驗的基礎(chǔ)上,確定了毒死蜱脅迫實驗濃度為0.2μg/L,此濃度下藥浴4 d后對凡納濱對蝦注射WSSV,結(jié)果顯示:毒死蜱脅迫下注射WSSV組的對蝦死亡率(83.33％±4.7%)極顯著高于乙醇-WSSV組(40%±0.9%);熒光定量PCR檢測對蝦鰓組織WSSV含量顯示:感染72h后,毒死蜱-WSSV組WSSV含量約是乙醇-WSSV組的4倍;感染96h后,毒死蜱-W

4、SSV組WSSV含量顯著增加,約是72h毒死蜱-WSSV組的4.9倍,是96h乙醇-WSSV對照組的5.9倍。毒死蜱脅迫下,對蝦肌肉組織乙酰膽堿酯酶(AChE)活性低于對照組20%左右。由此可見,毒死蜱脅迫下,WSSV增殖速率加快,導致對蝦死亡率升高。
　　為進一步探究毒死蜱對凡納濱對蝦的毒理學機制,本研究從免疫學的角度,檢測了亞致死劑量毒死蜱短期內(nèi)對凡納濱對蝦免疫相關(guān)基因表達變化的影響。首先在上述急性毒性實驗的基礎(chǔ)上,本實驗選擇

5、了毒死蜱藥浴濃度為1/296hLC50(0.38μg/L),分析了對蝦鰓和肌肉AChE活性的變化,然后通過熒光定量PCR檢測了毒死蜱藥浴4天對蝦鰓組織中酚氧化酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、溶菌酶(LyZ)和對蝦素(Penaeidin-3a)基因隨時間的表達變化。結(jié)果顯示:0.38μg/L毒死蜱藥浴4天期間,對蝦沒有出現(xiàn)狂游,身體抽搐等有機磷中毒的典型癥狀,沒有出現(xiàn)對蝦死亡。同時毒死蜱藥浴24h、48h、72

6、h、96h后,和對照組相比,除了鰓組織96h AChE活性被抑制15%左右,其他各時間點對蝦鰓和肌肉乙酰膽堿酯酶活性均沒有出現(xiàn)顯著性差異;熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示:受毒死蜱影響,對蝦PO mRNA表達水平顯著上調(diào),除0h外,其他四個時間點分別是對照組PO表達水平的1.38倍,1.54倍,1.95倍和1.40倍;對蝦SOD表達量開始上升,至48h達到最大,約是對照組SOD表達量的2.5倍,之后逐漸下降到正常水平;對蝦LyZ mRNA表達

7、量從24h到72h逐漸上升,72h達到最大值,約是對照組的2.24倍,之后下降;對蝦Penaeidin-3a的表達水平48h達到最高,約是對照組的2.14倍,之后逐漸下降接近正常水平;毒死蜱藥浴24h后CAT表達水平與對照組CAT水平基本一致,48h到72h,CAT表達水平逐漸上升,至72h表達水平約是對照組的1.66倍,96h表達水平出現(xiàn)下降。
　　綜上所述,毒死蜱對凡納濱對蝦屬于劇毒農(nóng)藥。在相同的實驗條件下,毒死蜱對幼蝦的毒性