凡納濱對(duì)蝦降血壓活性成份的研究.pdf

1、本研究在對(duì)凡納濱對(duì)蝦蝦頭及去頭蝦肉進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成份分析與評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)上，探討以?xún)?nèi)源酶酶解蝦頭蛋白及蝦肉蛋白的方式制備ACE抑制肽(ACEIP)，對(duì)兩種酶解產(chǎn)物采用凝膠層析法初步分離純化，并對(duì)其高活性組分的氨基酸組成進(jìn)行測(cè)定。最后通過(guò)原發(fā)性高血壓大鼠(SHR)的動(dòng)物試驗(yàn)進(jìn)行降血壓效應(yīng)評(píng)價(jià)。 本研究的主要結(jié)果如下： 1、對(duì)凡納濱對(duì)蝦蝦頭及去頭蝦肉進(jìn)行了基本營(yíng)養(yǎng)成份分析，粗蛋白含量分別為14.1％和17.6％，非蛋白氮分別為693m

2、g/100g和295mg/100g，非蛋白氮/總氮分別為30.7％和10.5％，說(shuō)明去頭蝦肉中的蛋白質(zhì)含量遠(yuǎn)高于蝦頭。分析了它們的游離氨基酸和結(jié)構(gòu)氨基酸組成，游離氨基氮總量占非蛋白氮的比例分別74.5％和59.5％，表明非蛋白氮的主要成份是游離氨基酸。蝦頭和去頭蝦肉中，第一限制氨基酸均為蘇氨酸，氨基酸價(jià)分別為78和87。兩種原料的氨基酸組成中，與ACEIP活性相關(guān)的7種氨基酸(亮氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸)

3、占氨基酸總量的比例分別為28.3％和31.9％。 2、確定了內(nèi)源酶酶解蝦頭蛋白法制備ACEIP的工藝條件：溫度為45℃、pH值為4、固液比為1/3、時(shí)間為2h，其ACE抑制率為40.7％(2mg/mL條件下測(cè)定)，可溶性蛋白濃度為20.7mg/mL。同時(shí)測(cè)得其水解度為24.2％。采用SephadexG-25對(duì)蝦頭酶解液進(jìn)行分離，分離條件為上樣濃度2.5mg/mL、流速0.4mL/min。分析測(cè)定了經(jīng)SephadexG-25分離后

4、的各組分的IC50值及氨基酸組成。分子量分布為403～84Da的組分對(duì)ACE的抑制作用最高，IC50值為0.75mg/mL。該組分中與ACE抑制活性相關(guān)的7種氨基酸占氨基酸總量的比例為58.9％，高于原料中的含量(28.3％)。 3、確定了內(nèi)源酶酶解蝦肉蛋白制備ACEIP的工藝條件：pH值為7.35，溫度為57.2℃，蝦頭/蝦肉為1/1，時(shí)間為4h，固液比為1/4，其ACE抑制率為41.9％(2mg/mL條件下測(cè)定)，可溶性蛋白

5、濃度24.9mg/mL。同時(shí)測(cè)得其水解度為61.9％。采用SephadexG-25分離酶解液，分子量分布為960～338Da的組分對(duì)ACE的抑制作用最高，IC50值為0.32mg/mL。該組分中與ACE抑活性相關(guān)的7種氨基酸占氨基酸總量的比例為42.3％，高于原料中的含量(30.1％)。通過(guò)對(duì)蝦頭蛋白酶解液和蝦肉蛋白酶解液比較，確定了蝦肉蛋白酶解產(chǎn)物作為后續(xù)研究的對(duì)象。 4、采用內(nèi)源酶酶解蝦肉蛋白的酶解產(chǎn)物，經(jīng)超濾、冷凍干燥后制

6、得樣品，喂食原發(fā)性高血壓大鼠，觀察其血壓在24h內(nèi)的變化情況。結(jié)果表明高劑量組的降壓效果最好，在灌胃4h后收縮壓(SBP)降低了22.5mmHg；其次是中劑量組和低劑量組，在灌胃6h后SBP分別降低了18.0mmHg和14.0mmHg；低劑量的降壓效果與給藥劑量為2.5mg/kgBW的卡托普利的降壓效果接近；各組具有顯著降壓效果的持續(xù)時(shí)間至少維持了4h，這表明酶解產(chǎn)物具有一定的降壓效果。將酶解產(chǎn)物喂食正常血壓的Wistar大鼠，其血壓并