斑馬魚mmp21基因在胚胎左右不對稱發(fā)育中作用的初步研究.pdf

1、目的：
　　探討敲低基質(zhì)金屬蛋白酶21(matrix metallopeptidase21，mmp21)基因?qū)Π唏R魚胚胎左右不對稱發(fā)育的影響。
　　方法:
　　在斑馬魚胚胎1~2細胞期顯微注射嗎啉反義寡核苷酸（morpholino antisense oligonucleotides，MO）敲低mmp21基因的表達。
　?。?）逆轉(zhuǎn)錄PCR（reverse transcription PCR，RT-PCR）檢測m

2、mp21 MO的有效性。
　?。?）利用整胚原位雜交(whole mount RNA in situ hybridization，WISH)檢測心臟和心外器官（腸道、腦）標(biāo)志物以評價斑馬魚胚胎左右不對稱發(fā)育情況。
　?。?）通過觀察活體胚胎心臟、計數(shù)心率和測量心室收縮分數(shù)(ventricular shortening fraction，VSF)評價心臟功能的改變。
　?。?）體視顯微鏡下觀察活體胚胎庫氏囊泡（Kupff

3、er's vesicle，KV）并拍照，利用Image J測量KV面積。
　?。?）通過整胚原位免疫熒光（whole mount in situ immunofluorescence）對乙?；⒐艿鞍祝╝cetylated-tubulin，AC-tubulin）染色以評價纖毛變化。
　?。?）通過WISH檢測中線屏障標(biāo)志物以觀察中線屏障的改變。
　　結(jié)果：
　　mmp21 MO能有效敲低mmp21基因。敲低mmp

4、21基因?qū)е掳唏R魚胚胎心臟、腸道以及腦部標(biāo)志物左右隨機分布，隨著 mmp21 MO濃度的增高，異常比例增高；活體胚胎心臟結(jié)構(gòu)異常，表現(xiàn)為心房、心室左右隨機分布；心臟功能損害，表現(xiàn)為心率減慢、心室收縮分數(shù)減少（P＜0.05）；KV面積變?。≒＜0.05），囊泡內(nèi)運動纖毛數(shù)量減少、長度變短（P＜0.05）；中線分子屏障lefty1部分或全部缺失。
　　結(jié)論：
　　敲低mmp21基因?qū)е掳唏R魚心臟和其他心外結(jié)構(gòu)（腸道、腦部）左右不