基于PET顯像技術(shù)的羅匹尼羅在帕金森猴體內(nèi)藥動(dòng)與藥效相關(guān)性研究.pdf

1、目的：MPTP法建立帕金森模型猴，采用以18F-Fallypride為顯像劑的正電子發(fā)射型計(jì)算機(jī)斷層成像掃描（PET）技術(shù)，研究不同劑量的羅匹尼羅對D2受體的結(jié)合位能（BP）值的影響，研究其與療效、安全性的相關(guān)性，確立其作為藥效指標(biāo)的有效范圍。在藥動(dòng)學(xué)研究的基礎(chǔ)上，考察藥動(dòng)與藥效及安全性的相關(guān)性，并建立PK-PD模型，為以血藥濃度預(yù)測其療效與安全性提供理論依據(jù)。
　　方法：⑴以18F-Fallypride為顯像劑，使用大動(dòng)物專用m

2、icro-PET對5只健康食蟹猴進(jìn)行100min的連續(xù)動(dòng)態(tài)掃描，掃描結(jié)果每10 min分幀一次進(jìn)行處理，繪制BP-時(shí)間曲線，得到顯像劑與D2受體穩(wěn)定結(jié)合的時(shí)間，并依此確定靜態(tài)掃描時(shí)間。對1只健康食蟹猴服用1 mg/kg羅匹尼羅前及服用后的1、2、4、6、8 h進(jìn)行靜態(tài)掃描，觀察羅匹尼羅在腦內(nèi)的結(jié)合行為，依此來確定評價(jià)藥效的掃描時(shí)間。建立食蟹猴血漿中羅匹尼羅藥物濃度測定的UPLC-MS/MS方法，并對方法進(jìn)行確證。⑵選用8只健康食蟹猴，使

3、用MPTP造模，經(jīng)兩個(gè)月模型穩(wěn)定期后，對模型從運(yùn)動(dòng)計(jì)數(shù)、行為學(xué)評分和使用18F-Fallypride為顯像劑的PET顯像三個(gè)方面進(jìn)行評價(jià)，并尋找PET顯像結(jié)果與傳統(tǒng)的行為學(xué)評分和運(yùn)動(dòng)計(jì)數(shù)之間的相關(guān)性，以期建立使用18F-Fallypride為顯像劑的PET評價(jià)模型標(biāo)準(zhǔn)。⑶有效性的評價(jià)包括行為學(xué)評分、運(yùn)動(dòng)計(jì)數(shù)和PET藥效評價(jià)指標(biāo)的建立。通過不同劑量羅匹尼羅（1.0，0.5，0.2（1.5）mg/kg）連續(xù)給藥（每天給藥三次），每組給藥21

4、天后引起的PET顯像D2受體結(jié)合位能（BP）的變化率與行為學(xué)評分變化率的相關(guān)性分析，建立PET療效評價(jià)指標(biāo)。安全性評價(jià)包括每個(gè)劑量組給藥后的1,、3、7、14、21天進(jìn)行臨床癥狀的觀察；血壓、心率的測定；血常規(guī)、血生化、尿常規(guī)的檢查。并進(jìn)行BP值與安全性的相關(guān)性分析。⑷PD猴連續(xù)給以不同劑量的羅匹尼羅7天后進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)，給藥前和給藥后0.5，0.75，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4，5，6，7，8 h采集血樣。使用超高效液

5、相串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）測定血漿中羅匹尼羅濃度，WinNonlin軟件的非房室模型分析血漿樣本的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。通過線性回歸分析藥動(dòng)參數(shù)與藥效的相關(guān)性，通過ROC曲線分析法分析藥動(dòng)參數(shù)與不良反應(yīng)之間的關(guān)系?；谝陨舷嚓P(guān)性的研究結(jié)果使用WinNonlin軟件對羅匹尼羅在食蟹猴體內(nèi)的血漿藥動(dòng)學(xué)和PET顯像的多巴胺D2受體BP值進(jìn)行分析，擬合最佳藥動(dòng)-藥效（PK-PD）模型。
　　結(jié)果：①使用UPLC-MS/MS方法測定食蟹猴血

6、漿中羅匹尼羅濃度，線性范圍為20、50、100、200、500、1000、2000、5000 pg·mL-1，線性良好（r2>0.99）。方法的批間、批內(nèi)精密度，回收率，基質(zhì)效應(yīng)，穩(wěn)定性等均符合生物樣本的測定要求。②建立了穩(wěn)定的帕金森病猴模型，具有僵直、震顫、行動(dòng)緩慢等典型的帕金森病特征，適合其治療藥物的相關(guān)研究。模型評價(jià)中，除了進(jìn)行了傳統(tǒng)的行為學(xué)評價(jià)及運(yùn)動(dòng)計(jì)數(shù)的研究，同時(shí)還建立了PET顯像技術(shù)評價(jià)帕金森模型成立的方法。造模后，行為學(xué)評

7、分穩(wěn)定在8-10分，運(yùn)動(dòng)計(jì)數(shù)平均減少70±20％，PET顯像BP值平均減少54±13%，PET顯像結(jié)果與帕金森模型評分和運(yùn)動(dòng)計(jì)數(shù)具有高度一致性，適合帕金森模型的評價(jià)，可以作為模型成功的評價(jià)指標(biāo)之一。③由于BP值存在一定的藥效累積，所以隨著給藥時(shí)間的加長和給藥劑量的減少，多巴胺D2受體的BP值不斷升高，行為學(xué)評分逐漸下降，運(yùn)動(dòng)計(jì)數(shù)逐漸增加。但每個(gè)劑量組BP值的變化率與給藥劑量以及行為學(xué)評分變化率呈很好的正相關(guān)性。通過行為學(xué)評分變化率與BP

8、值變化率的線性回歸分析（y=1.0394x-4.1574（r2=0.8567）），推測當(dāng)BP值改善大于14%開始起效，當(dāng)BP值改善在14%~24%時(shí)有中等療效，當(dāng)BP值改善在33%以上時(shí)認(rèn)為非常有效。④羅匹尼羅在給藥后的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)經(jīng)非房室模型分析，四個(gè)劑量組的消除半衰期（t1/2）為1.45、1.48±0.14、1.7±0.44、1.85±0.35 h，表觀分布容積(Vz)分別為219.55、311.02±264.34、304.86±1

9、80.08、415.53±233.78L?kg-1，清除率（Cl）分別為105.17、142.35±111.73、123.36±77.52、127.77±89.88 L?h-1?kg-1。除去個(gè)體差異較大的8號(hào)猴外，在0.2~1.5 mg/kg劑量范圍內(nèi)，羅匹尼羅在食蟹猴血漿中呈線性藥代動(dòng)力學(xué)行為。⑤經(jīng)藥動(dòng)參數(shù)（Cmax和AUC0-t）與有效性（BP值變化率）線性回歸分析推測當(dāng)Cmax達(dá)到1.21ng/mL，AUC0-t達(dá)到2.34h?

10、ng?mL-1時(shí)開始起效；經(jīng)ROC曲線分析藥動(dòng)參數(shù)（Cmax和AUC0-t）與安全性的關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)Cmax大于2.68 ng/mL，AUC0-∞大于3.77 h?ng?mL-1時(shí)容易發(fā)生不良反應(yīng)。
　　結(jié)論：PET可以用來評價(jià)羅匹尼羅對帕金森疾病的治療效果，并且比行為學(xué)評分等評判手段更為客觀；通過藥動(dòng)學(xué)與藥效、安全性相關(guān)性分析及PKPD模型的建立，說明三者有很好的相關(guān)性，為臨床上通過簡單的血藥濃度監(jiān)測預(yù)測有效性及安全性奠定了堅(jiān)實(shí)