小鼠動(dòng)力性肺動(dòng)脈高壓肺組織TGF-β1及相關(guān)miRNAs表達(dá)變化的研究.pdf

1、目的：本研究通過小鼠動(dòng)力性肺動(dòng)脈高壓模型探索肺組織TGF-β1及相關(guān)miRNAs的表達(dá)與肺血管重構(gòu)及肺動(dòng)脈高壓形成之間的關(guān)系，進(jìn)而了解 TGF-β1及相關(guān) miRNAs的表達(dá)是否與肺動(dòng)脈高壓的進(jìn)展快慢有相關(guān)性，從而提供早期診斷 CHD-PAH（先天性心臟病相關(guān)肺動(dòng)脈高壓）的臨床指標(biāo)。方法：建立肺動(dòng)脈高壓小鼠模型，以模型小鼠肺組織為研究對象，進(jìn)一步驗(yàn)證血流動(dòng)力學(xué)的改變對肺組織TGF-β1及相關(guān)miRNAs表達(dá)的影響。
　　方法如下：

2、將20只雄性C57小鼠隨機(jī)分成2組：A1，A2，其中A1為實(shí)驗(yàn)組，A2為假手術(shù)組。兩組均采用戊巴比妥鈉以40mg/kg腹腔麻醉。實(shí)驗(yàn)組左側(cè)第3肋間開胸，切除左肺，假手術(shù)組左側(cè)第3肋間開胸，不切除左肺。手術(shù)8周后處死，實(shí)驗(yàn)組、假手術(shù)組分別測右心室收縮壓（RVSP）及稱量右心室（RV）和左心室（LV）+室間隔（SP）的質(zhì)量，計(jì)算右心肥厚指數(shù)（RVHI）（右心室和左心室+室間隔的比值）。實(shí)驗(yàn)組，假手術(shù)組的右肺分別進(jìn)行HE染色后做病理切片，分析

3、判斷模型是否符合肺動(dòng)脈高壓的病理生理改變，用免疫組化檢測TGF-β1在肺動(dòng)脈的表達(dá)情況,qRT-PCR分別檢測TGF-β1及相關(guān)miRNAs的表達(dá)量。
　　結(jié)果：（1）與假手術(shù)組相比，實(shí)驗(yàn)組的RVSP為49.7±6.82mmhg，RVHI為0.347±0.04，假手術(shù)組的RVSP為20.3±4.53mmhg，RVHI為0.199±0.03（均為P<0.01），實(shí)驗(yàn)組較假手術(shù)組RVSP及RVHI均明顯升高。實(shí)驗(yàn)組肺組織切片鏡下可見血

4、管內(nèi)皮層明顯增生，微血管瘤形成，細(xì)小肺血管閉塞、機(jī)化，肺血管平滑肌層和內(nèi)外彈力纖維層均明顯增厚，中膜增厚，血管腔減小，肺動(dòng)脈橫切面積為3級，免疫組化檢測TGF-β1蛋白表達(dá)顯著高于假手術(shù)組（均為P<0.05）。（2）在實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物模型肺組織中的 TGF-β1的表達(dá)量為假手術(shù)組肺組織的1-3倍,實(shí)驗(yàn)組小鼠肺組織中 miRNA-19a表達(dá)較假手術(shù)組增高15-30倍， miRNA-18a表達(dá)增高1-4倍，miRNA-23a表達(dá)1-2.5倍，mi