紅曲拮抗高脂膳食誘導(dǎo)大鼠非酒精性脂肪肝分子機(jī)制研究.pdf

1、非酒精性脂肪肝（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）僅次于病毒性肝炎的第二大肝病，已經(jīng)成為我國(guó)常見(jiàn)的慢性肝病之一，其發(fā)病率大約為14～20%，嚴(yán)重危害人民生活健康。NAFLD以彌漫性肝細(xì)胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合征，包括單純性脂肪肝及其演變的脂肪性肝炎（NASH）和肝硬化。研究發(fā)現(xiàn)遺傳易感性、胰島素抵抗、腸源性?xún)?nèi)毒素血癥以及PPARα與其發(fā)病關(guān)系密切。其中胰島素抵抗是關(guān)鍵的始動(dòng)因素

2、，腸源性?xún)?nèi)毒素血癥以及PPARα的表達(dá)下調(diào)作為“二次打擊”，最終造成脂肪在肝臟大量蓄積出現(xiàn)脂肪肝的病理改變。 祖國(guó)醫(yī)學(xué)雖無(wú)“脂肪肝”的病名，《內(nèi)經(jīng)》中有“肝滿(mǎn)”、“肝脹”、“脅痛”等記載，符合脂肪肝的臨床表現(xiàn)。其病位在肝，與膽、脾、胃、腎均有關(guān)。多因過(guò)食肥甘，或飲酒過(guò)度，或感受濕熱疫毒，或情志失調(diào)，或久病體虛，導(dǎo)致痰濕瘀阻互結(jié)，痹阻肝臟脈絡(luò)而成。紅曲性味甘、溫、無(wú)毒，歸肝、脾胃、大腸經(jīng)，具有健脾消食、活血化淤之功效；現(xiàn)代藥理研究

3、發(fā)現(xiàn)其有效成份之一的洛伐他汀，具有較為理想的抗炎、降膽固醇的功效，已在臨床廣泛利用。因此，本課題組推測(cè)，紅曲可能具有較好的抗NAFLD的效應(yīng)，對(duì)紅曲抗NAFLD的分子機(jī)制深入研究，是中藥創(chuàng)新的切入點(diǎn)。 本項(xiàng)目在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究進(jìn)展，通過(guò)高脂飲食誘導(dǎo)胰島素抵抗NAFLD大鼠模型，繼而予以不同劑量紅曲干預(yù)8周，以絞股藍(lán)為陽(yáng)性對(duì)照組，采用HE染色、全自動(dòng)生化分析、胰島素-血糖鉗夾、RT-PCR、Western-blo

4、t、ELISA等實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)各組大鼠血脂、肝臟生化、胰島素抵抗以及TNF-α、IL-6、IL-10、PPARα等指標(biāo)的變化，探討紅曲治療NAFLD的效應(yīng)及其作用機(jī)制，為提高中醫(yī)藥防治水平提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 目的： 觀察紅曲對(duì)胰島素抵抗，肝臟生化、血脂改變以及TNF-α、IL-6、IL-10、PPARα等指標(biāo)的影響，探討胰島素抵抗、腸源性?xún)?nèi)毒素血癥以及過(guò)氧化物增殖激活受體在大鼠NAFLD發(fā)病中的作用及紅曲拮抗NAFLD的分子機(jī)

5、制。 方法： 48只SD大鼠，雌雄各半，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按體重隨機(jī)分為6組，正常組、模型組、絞股藍(lán)組、紅曲低劑量組、紅曲中劑量組、紅曲高劑量組，每組8只。正常組予普通飼料，同步飼養(yǎng)8周；其余各組予高脂飼養(yǎng)喂養(yǎng)，并分別予等劑量生理鹽水、絞股藍(lán)水溶液、低、中、高劑量紅曲水溶液灌胃，連續(xù)8周。第9周，處死所有大鼠，取肝臟及腹主動(dòng)脈血備用。 HE染色、光鏡下對(duì)各組大鼠肝臟組織病理學(xué)評(píng)分，從形態(tài)學(xué)上分析NAFLD大鼠及

6、紅曲干預(yù)后肝臟組織結(jié)構(gòu)的變化；全自動(dòng)生化分析儀分析血清ALT、AST、及血脂變化；放免法檢測(cè)肝纖四項(xiàng)；正常葡萄糖-高胰島素鉗夾技術(shù)評(píng)估胰島素抵抗變化，以觀察紅曲改善胰島素抵抗的效應(yīng)；ELSIA及RT-PCR技術(shù)檢測(cè)各組大鼠TNF-α、IL-6、IL-10水平變化，分析紅曲對(duì)TNF-α、IL-6、IL-10的影響，以觀察紅曲對(duì)上述細(xì)胞因子的調(diào)控機(jī)制；Western-blot、RT-PCR技術(shù)檢測(cè)各組大鼠肝臟PPARα mRNA和蛋白水平變

7、化，從蛋白表達(dá)水平和從基因轉(zhuǎn)錄水平分析NAFLD大鼠肝臟PPARα的情況及紅曲對(duì)其進(jìn)行治療后的肝臟PPARα的影響。 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：計(jì)量資料用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，數(shù)據(jù)處理采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA）；計(jì)數(shù)資料采用秩和檢驗(yàn)。P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.紅曲對(duì)NAFLD大鼠的癥狀、體征的影響 2.紅曲對(duì)NAFLD大鼠肝組織形態(tài)學(xué)的影響

8、 3.紅曲對(duì)NAFLD大鼠肝功能、血脂的影響 4.紅曲對(duì)NAFLD大鼠肝纖維化的影響 5.紅曲對(duì)NAFLD大鼠胰島素抵抗的影響 6.紅曲對(duì)NAFLD大鼠腸源性?xún)?nèi)毒素血癥的影響 7.紅曲對(duì)NAFLD大鼠肝臟PPARα的影響 結(jié)論： 1連續(xù)8周高脂飲食成功建立了大鼠脂肪肝胰島素抵抗模型。該模型的病理特征為肝細(xì)胞呈大泡性脂肪變性，伴小葉內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、一定程度的肝纖維化和線粒體結(jié)構(gòu)的異常；代謝

9、特征為胰島素抵抗、高胰島素血癥、高脂血癥、和血清轉(zhuǎn)氨酶升高。該模型與人類(lèi)肥胖所致NAFLD的病理和代謝改變極其相似，造模簡(jiǎn)單、模型成功率高，為研究NAFLD的發(fā)病機(jī)制，篩選有效的防治藥物提供了良好的工具。 2紅曲能有效的拮抗大鼠NAFLD的進(jìn)程，其作用機(jī)制為： ①紅曲能夠改善NAFLD模型大鼠的一般情況：如改善大鼠模型的精神狀況、耗食量、以及營(yíng)養(yǎng)狀況。 ②肝臟病理學(xué)觀察表明紅曲能改善肝臟脂肪變性，減少肝細(xì)胞壞死以

10、及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。 ③紅曲降低NAFLD模型大鼠血清ALT、AST含量，但無(wú)明顯降低血甘油三脂的效應(yīng)。提示紅曲能有效減輕炎癥反應(yīng)，保護(hù)肝細(xì)胞，減輕脂肪性肝炎改變。 ④紅曲降低NAFLD模型大鼠胰島素抵抗及高胰島素血癥，增加胰島素敏感性，從而阻斷“初次打擊”。 ⑤紅曲降低NAFLD模型大鼠組織中TNF-α的表達(dá)，改善腸原性?xún)?nèi)毒素血癥，從而抑制選擇性胰島素抵抗，阻斷“二次打擊”，抑制脂肪肝的發(fā)生。 ⑥紅曲能升高