食物抗原與類風濕性關(guān)節(jié)炎的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　 1.通過建立類風濕性關(guān)節(jié)炎大鼠CIA模型,尋找一種新的可以干擾或作用于RA的蛋白,初步探討此蛋白與RA的相關(guān)性；
　　 2.分析這種蛋白在RA發(fā)病機制中的作用。
　　 方法:
　　 1.建立類風濕性關(guān)節(jié)炎的動物模型(CIA模型):牛Ⅱ型膠原蛋白(BoyineCollagenⅡ)和弗氏不完全佐劑(IFA)充分乳化后作為CIA模誘導(dǎo)劑,對Wistar大鼠尾根、足底、背部和脊椎兩側(cè)四點注射,一周后

2、加強免疫一次,對CIA模型進行全面評價,如:關(guān)節(jié)腫脹度、組織病理學、免疫組化檢測和細胞因子檢測等；
　　 2.食物抗原與CIA的相關(guān)性:通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測和免疫印跡法(Western blot)初步檢測食物中一些抗原和食物中各種異源型膠原蛋白與CIA的相關(guān)性；
　　 3.蛋白結(jié)構(gòu)分析:通過Protein Explorer2.80蛋白三維重建軟件和Peptool Liter蛋白質(zhì)二維重建軟件對特異性蛋白結(jié)

3、構(gòu)的初步預(yù)測,分析特異性蛋白的結(jié)構(gòu)相關(guān)性,解釋說明實驗結(jié)果；
　　 4.食物抗原干預(yù)CIA模型:為了研究臨床食物抗原對類風濕性關(guān)節(jié)炎患者的影響,本實驗用食物抗原對CIA模型進行干預(yù),即對CIA模型鼠進行食物抗原灌胃實驗,檢測CIA模型大鼠的各方面變化,觀察記錄實驗鼠的活動和飲食變化,觀察腸道病理變化和代謝變化,并對實驗結(jié)果進行分析總結(jié)。
　　 結(jié)果:
　　 1.動物模型在首次免疫后,實驗組大鼠食欲開始下降,活動頻

4、繁度下降,加強免疫后一周,實驗組大鼠四肢腫脹,佐劑對照組和空白對照組的大鼠無明顯變化,實驗組大鼠踝關(guān)節(jié)直徑,血清TNF-α、IL-17、IL-6和IL-1水平明顯高于佐劑對照組和空白對照組；實驗組踝關(guān)節(jié)滑膜細胞免疫熒光抗原定位檢測到很強的熒光,佐劑對照組和空白對照組熒光強度很弱；實驗組RA的發(fā)病率為77.8％;
　　 2.血清ELISA檢測食物中異源性膠原蛋白的免疫原性很高,八大類食物抗原中雞蛋和牛奶與RA存在交叉免疫,并進行統(tǒng)

5、計學分析,差距有統(tǒng)一學意義(P<0.05); Western—blot檢測到雞蛋和牛奶中存在實驗組有別于佐劑對照組和空白對照組有兩條蛋白條帶(分別在45kd～60kd和80kd～90kd之間),初步認為雞蛋中的特異性蛋白是卵清蛋白,牛奶中的特異性蛋白為酪蛋白；
　　 3.牛Ⅱ型膠原蛋白、雞蛋中卵清蛋白和牛奶中的酪蛋白的二維和三維結(jié)構(gòu)分析認為此三種蛋白在結(jié)構(gòu)上存在相同的抗原位點和結(jié)構(gòu)相似性,即雞蛋中的卵清蛋白和牛奶中的一種蛋白(初

6、步認為是酪蛋白)的抗原表位與牛Ⅱ型膠原蛋白存在部分結(jié)構(gòu)相似性；
　　 4.對CIA模型大鼠灌胃實驗發(fā)現(xiàn),大鼠的炎癥細胞因子的水平升高,腸道的通透性增大,胃腸道病理發(fā)生改變。
　　 結(jié)論:
　　 1.Ⅱ型膠原蛋白配合弗氏不完全佐劑可以很好的誘導(dǎo)建立CIA模型；
　　 2.初步認為食物抗原雞蛋中(初步認為是卵清蛋白)和牛奶中的一種蛋白(初步認為是酪蛋白)與RA的發(fā)病存在一定的相關(guān)性,可能加重RA的病情,對于其