乙醇影響AC16心肌細(xì)胞內(nèi)糖原沉積與AKT2及GLUT4蛋白的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　酒精性心肌病(Alcoholic Cardiomyopathy,ACM)是一種獲得性擴(kuò)張型心肌病，與長期的酒精攝入（80g/天，大于5年）有關(guān)，主要表現(xiàn)為左心室擴(kuò)張，心肌收縮力減低及心律失常等。在ACM患者及動物模型中，透射電鏡下可見心肌細(xì)胞內(nèi)糖原、脂滴異常累積，線粒體結(jié)構(gòu)異常等，但相關(guān)機(jī)制尚未明確。ACM發(fā)病機(jī)制比較復(fù)雜，已有學(xué)者在多方面進(jìn)行探究，包括線粒體功能障礙、氧化應(yīng)激、糖脂代謝紊亂等機(jī)制，目前關(guān)于乙醇對線粒體

2、生成，肌絲鈣離子敏感性及氧化應(yīng)激的影響受到廣泛關(guān)注，而關(guān)于乙醇對心肌細(xì)胞內(nèi)糖原累積的相關(guān)機(jī)制研究不夠深入。GLUT4(Glucose transporter4)為葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體，在心肌、骨骼肌及脂肪組織中均有高水平表達(dá)，絲氨酸蘇氨酸激酶(AK mouse Thymoma，AKT2)是調(diào)控GLUT4轉(zhuǎn)位的關(guān)鍵蛋白，二者對細(xì)胞攝取葡萄糖具有重要的調(diào)控作用。實驗主要檢測不同乙醇濃度對AC16細(xì)胞AKT2及GLUT4表達(dá)影響，探究ACM患者心肌細(xì)

3、胞內(nèi)糖原沉積的分子學(xué)機(jī)制。
　　方法：
　　1、AC16心肌細(xì)胞培養(yǎng)、傳代及凍存;
　　2、應(yīng)用MTT法檢測不同乙醇濃度對AC16細(xì)胞存活率影響，選擇合適的乙醇濃度用于后續(xù)實驗;
　　3、實驗分組:正常對照組(0mmol/L)，低濃度乙醇組（50mmol/L），中濃度乙醇組(100mmol/L)，高濃度乙醇組(200mmol/L);
　　4、光鏡和電鏡下觀察不同乙醇濃度對AC16細(xì)胞形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)影響;

4、r>　　5、應(yīng)用Western-Blot技術(shù)檢測不同乙醇濃度對AKT2及GLUT4表達(dá)水平的影響;
　　6、計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析比較組間差異，P＜0.05提示有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果：
　　1、應(yīng)用MTT法測定不同濃度乙醇對細(xì)胞存活率影響，200mmol/L以下乙醇濃度對細(xì)胞存活率無明顯影響，當(dāng)濃度達(dá)到300mmol/L時可見細(xì)胞存活率下降至76.2±

5、2.7％(n=3，P＜0.05)，500mmol/L時細(xì)胞存活率下降至45.9±3.1％(n=3,P＜0.05)。因此實驗中應(yīng)用200mmol/L濃度乙醇為最高濃度。實驗分組:正常對照組（0mmol/L），低濃度乙醇組（50mmol/L），中濃度乙醇組(100mmol/L)，高濃度乙醇組（200mmol/L）。
　　2、光鏡下觀察不同乙醇濃度對細(xì)胞形態(tài)影響，低濃度乙醇組無明顯改變，中濃度乙醇組細(xì)胞體積及細(xì)胞核增大，高濃度乙醇組細(xì)胞

6、結(jié)構(gòu)改變更為明顯。
　　3、電鏡下觀察AC16細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變，與正常對照組相比，高濃度乙醇組細(xì)胞內(nèi)線粒體數(shù)量有所減少，且有大量糖原聚集于細(xì)胞內(nèi)。
　　4、不同乙醇濃度對AC16細(xì)胞AKT2表達(dá)水平影響:AKT2在低濃度乙醇組（50mmol/L）無明顯改變;中濃度乙醇組（100mmol/L）增強(qiáng)66.2％±3.4％(n=3，P＜0.05);高濃度乙醇組(200mmol/L)增強(qiáng)98.9‰1.5％(n=3，P＜0.05)。

7、r>　　5、不同乙醇濃度對AC16細(xì)胞GLUT4表達(dá)水平影響:GLUT4在低濃度乙醇組（50mmol/L）無明顯改變;而中濃度乙醇組（100mmol/L）表達(dá)增強(qiáng)35.6％±4.1％（n=3，P＜0.05）;高濃度乙醇組(200mmol/L)表達(dá)增強(qiáng)更為明顯，增強(qiáng)56.9％±2.2％(n=3,P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　乙醇可通過上調(diào)AC16心肌細(xì)胞AKT2及GLUT4表達(dá)，促進(jìn)GLUT4轉(zhuǎn)位，增強(qiáng)心肌細(xì)胞對葡萄糖的攝