消癥方治療子宮腺肌病的細胞學機制研究.pdf

1、目的:
　　本研究將采用膠原酶消化法處理子宮腺肌病的在位子宮內(nèi)膜組織，并運用體外細胞分離培養(yǎng)技術，原代分離培養(yǎng)腺肌病在位子宮內(nèi)膜間質細胞。采用含藥血清處理細胞的方法，通過Transwell細胞遷移試驗、Matrigel細胞侵襲試驗及FN細胞黏附試驗觀察消癥方對子宮腺肌病的在位子宮內(nèi)膜間質細胞的遷移、侵襲和黏附能力的影響，從而探討消癥方治療子宮腺肌病可能的細胞學機制。同時為消癥方臨床應用于治療子宮腺肌病提供科學證據(jù)和實驗基礎，也為中

2、醫(yī)消癥化瘀法治療子宮腺肌病賦予新的內(nèi)涵，并從細胞運動和黏附功能的改變上認識子宮腺肌病發(fā)生發(fā)展的可能機制，為該疾病的保守治療提供新的思路。
　　方法:
　　1.本研究將選擇2014年1月至2015年5月在廣東省中醫(yī)院婦一科要求行全子宮切除術治療，且術后病理確診為子宮腺肌病的患者8例，在無菌條件下取其子宮內(nèi)膜組織用于體外分離培養(yǎng)。運用膠原酶Ⅰ對上述所得子宮內(nèi)膜組織進行消化處理，后經(jīng)過濾、離心，原代分離培養(yǎng)出腺肌病在位子宮內(nèi)膜間質

3、細胞，并采用免疫細胞化學的方法對細胞進行鑒定。
　　2.本研究實驗動物選擇SPF級SD雌性未孕大鼠15只，均購自廣東省中醫(yī)藥科學院實驗動物中心。將其隨機分為3組，分別為消癥方組、孕三烯酮組及對照組。計算各藥物臨床等效劑量并分別使用消癥方懸液、孕三烯酮懸液和生理鹽水對上述三組大鼠進行灌胃處理后，經(jīng)10％水合氯醛行腹腔注射麻醉后，行腹主動脈采血，通過高速離心，分離并收集血清，從而分別制備出消癥方含藥血清、孕三烯酮含藥血清及對照血清。<

4、br>　　3.分別將消癥方含藥血清、孕三烯酮含藥血清和對照血清與高糖DMEM培養(yǎng)液配制成血清濃度為5％、10％、20％的細胞培養(yǎng)液，分別作用于上述分離培養(yǎng)所得的子宮腺肌病在位子宮內(nèi)膜間質細胞24h后，通過Transwell細胞遷移試驗，Matrigel細胞侵襲試驗及FN細胞黏附試驗比較經(jīng)上述各組細胞培養(yǎng)液作用后的腺肌病在位子宮內(nèi)膜間質細胞其遷移、侵襲和黏附等細胞學行為的變化。
　　成果:
　　1.本研究通過膠原酶Ⅰ對子宮腺肌

5、病在位子宮內(nèi)膜組織進行消化，并通過過濾、離心等步驟，成功分離培養(yǎng)出7例腺肌病在位子宮內(nèi)膜間質細胞，并使用間質細胞特異性指標波形蛋白(vimentin)，對原代分離培養(yǎng)后第4代細胞進行免疫細胞化學鑒定，證實為子宮內(nèi)膜間質細胞。
　　2.本研究運用體外實驗證明，消癥方含藥血清影響原代培養(yǎng)的腺肌病在位子宮內(nèi)膜間質細胞的遷移、侵襲和黏附能力:5％、10％、20％三個濃度的對照血清對腺肌病在位子宮內(nèi)膜間質細胞的遷移、侵襲和黏附能力的影響，差

6、異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。與相同血清濃度的對照血清組相比，消癥方含藥血清組及孕三烯酮含藥血清組其各組遷移、侵襲及黏附的細胞數(shù)均有不同程度的減少，且差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05)。而與相同血清濃度的孕三烯酮含藥血清組相比較，血清濃度為20％的消癥方含藥血清能更顯著地抑制腺肌病在位子宮內(nèi)膜間質細胞的遷移、侵襲及黏附能力，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05)。
　　結論:
　　1.消癥方含藥血清能有效地抑制腺肌病在位子宮內(nèi)膜