消癥方對子宮腺肌病內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞增殖、凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　通過采用膠原酶消化法處理子宮腺肌病在位及異位病灶子宮內(nèi)膜組織，體外分離培養(yǎng)腺肌病在位及異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞，觀察腺肌病內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的生長增殖曲線，通過將藥物直接作用于細(xì)胞，采用MTT法檢測藥物對細(xì)胞的增殖抑制作用，顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期，觀察消癥方對腺肌病在位及異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞增殖和凋亡的影響，闡釋消癥方治療子宮腺肌病的作用機(jī)理，為臨床治療子宮腺肌病提供實驗論證和理論基礎(chǔ)，為

2、中醫(yī)采用消癥化瘀法治療子宮腺肌病賦予新的內(nèi)涵，為子宮腺肌病的保守治療提供新的思路。
　　方法:
　　1.本實驗研究選擇2014年12月-2015年12月在廣東省中醫(yī)院大德路總院婦科行全子宮切除術(shù)，且術(shù)后病理診斷為子宮腺肌病的患者6例，子宮全切后，無菌操作分別取在位子宮內(nèi)膜、異位病灶內(nèi)膜組織，采用膠原酶消化法體外分離培養(yǎng)子宮腺肌病在位及異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞，并采用免疫組織化學(xué)方法對細(xì)胞進(jìn)行純度鑒定。
　　2.采用水提法制備含

3、藥培養(yǎng)液，并將實驗分為5組:消癥方高劑量組、消癥方中劑量組、消癥方低劑量組、孕三烯酮組以及空白對照組。通過將藥物直接作用于子宮腺肌病在位及異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞24h，采用MTT法觀察消癥方含藥培養(yǎng)液對腺肌病細(xì)胞的增殖抑制作用，采用蘇木素-伊紅染色（HE染色）方法顯微鏡下觀察消癥方直接作用于細(xì)胞之后的凋亡細(xì)胞形態(tài);同時利用流式細(xì)胞儀檢測藥物對細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期的作用。
　　成果:
　　1.本實驗研究通過采用Ⅰ型膠原酶消化、篩網(wǎng)過濾

4、等方法原代培養(yǎng)子宮腺肌病在位及異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞，取得標(biāo)本共6例，最終培養(yǎng)成功5例。并通過選用對腺肌病間質(zhì)細(xì)胞具有特異性的波形蛋白，對原代培養(yǎng)的腺肌病在位及異位內(nèi)膜細(xì)胞進(jìn)行免疫組織化學(xué)方法鑒定，由細(xì)胞鑒定可知，原代培養(yǎng)出的子宮腺肌病在位及異位內(nèi)膜細(xì)胞中內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的純度均高達(dá)99％以上。
　　2.消癥方及孕三烯酮組均可抑制子宮腺肌病在位及異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的增殖，且消癥方在一定范圍內(nèi)能呈劑量依賴性的抑制腺肌病細(xì)胞增殖。
　　

5、3.消癥方組及孕三烯酮組顯微鏡下均可觀察到:部分細(xì)胞變得固縮，細(xì)胞質(zhì)變得致密，細(xì)胞核染色質(zhì)濃集，為凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征。
　　4.消癥方對子宮腺肌病在位及異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的凋亡的流式細(xì)胞術(shù)檢測:藥物直接作用于腺肌病細(xì)胞24h后，與空白對照組相比，消癥方高、中、低劑量組及孕三烯酮組均能顯著促進(jìn)在位及異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞凋亡(P＜0.05)，且消癥方組隨著藥物濃度的升高，凋亡率也隨之增加。
　　5.消癥方對子宮腺肌病在位及異位內(nèi)膜間

6、質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞周期的流式細(xì)胞術(shù)檢測:消癥方高、中、低劑量組及孕三烯酮組均可引起腺肌病在位及異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞發(fā)生S期阻滯，且消癥方組阻滯細(xì)胞周期呈一定的濃度依賴性。
　　結(jié)論:
　　1.消癥方能有效抑制子宮腺肌病在位及異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的增殖，對子宮腺肌病在位及異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的生長有促進(jìn)其凋亡的作用，并且能通過將子宮腺肌病在位及異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞阻斷于S期以阻斷周期進(jìn)程。
　　2.消癥方治療子宮腺肌病的作用可能與其通過抑制子