短期碘過量激活大鼠甲狀腺的Nrf2-Keap1抗氧化防御.pdf

1、目的：
　　氧化應(yīng)激是碘過量引起甲狀腺疾病的潛在機(jī)制之一。核因子E2-相關(guān)因子2（nuclear factor E2-related factor, Nrf2）是一個重要的轉(zhuǎn)錄因子，其對調(diào)節(jié)一些抗氧化酶的表達(dá)有重要作用，如Sulfiredoxin（Srx）和Peroxiredoxin3（Prx3）。在氧化應(yīng)激下，Nrf2與Kelch樣ECH相關(guān)蛋白（Keap1）解離，從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核并激活下游的抗氧化蛋白。通過研究短期碘過量對

2、 Wistar大鼠甲狀腺內(nèi)Nrf2-Keap1通路及其調(diào)控的抗氧化蛋白Srx和Prx3表達(dá)的影響，探討短期碘過量對甲狀腺氧化應(yīng)激和抗氧化防御的影響。
　　方法：
　　建立短期（7天、14天和28天）碘過量的動物模型：選用10~12周，體重280~300g的Wistar大鼠，隨機(jī)分為適碘（normal iodide, NI）攝入組，10倍高碘（10 times high iodide,10 HI）攝入組和100倍高碘（100

3、high iodide,100 HI）攝入組。通過飲用含不同濃度碘化鉀（potassium iodide, KI）的去離子水和喂養(yǎng)正常飼料，使三組大鼠每日攝碘量分別為7.5μg/d、75μg/d和750μg/d。測量大鼠體重，甲狀腺重量，并計算甲狀腺臟體比；采用過硫酸銨消化砷鈰催化分光光度法測定大鼠尿碘濃度；采用直接化學(xué)發(fā)光技術(shù)的競爭免疫法測定大鼠血清甲狀腺激素水平；采用特異性靶向線粒體的新型熒光染料 MitoSOX，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測

4、大鼠甲狀腺線粒體超氧化物生成；采用western blot方法檢測蛋白Nrf2、Keap1、Srx和Prx3表達(dá)的變化；采用免疫熒光染色，通過共聚焦熒光顯微鏡觀察大鼠甲狀腺Nrf2，Srx的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.甲狀腺臟體比：大鼠在NI、10 HI和100 HI攝入7天、14天和28天后，不同倍數(shù)碘對大鼠體重、甲狀腺重量和甲狀腺臟體比無明顯影響（p>0.05）。
　　2.尿碘濃度：大鼠在分別喂養(yǎng)7天、14天和28

5、天后，與NI組相比，10 HI組和100 HI組尿碘濃度隨著碘攝入量的增加顯著增加（p<0.05）。當(dāng)?shù)鈹z入量從NI增加至10 HI攝入時，尿碘排出量增加至NI組尿碘排出的10倍左右，而當(dāng)增加至100 HI攝入時，尿碘排出僅增加至NI組尿碘排出的60~80倍。
　　3.血清甲狀腺激素水平：NI、10 HI和100 HI攝入7天、14天和28天，不同倍數(shù)碘對大鼠血清甲狀腺激素（T3、T4、FT3、FT4和 TSH）水平，比值 T3/

6、T4無明顯影響（p>0.05）。
　　4.線粒體超氧化物生成：在7天、14天和28天各時間點，與NI組相比，100 HI組線粒體超氧化物產(chǎn)生明顯增加（p<0.05）；與10 HI組相比，100 HI組線粒體超氧化物產(chǎn)生顯著增加（p<0.05）。在100 HI組，與7天相比，28天的線粒體超氧化物產(chǎn)生顯著增加（p<0.05）；同樣，與14天相比，28天的線粒體超氧化物產(chǎn)生也顯著增加（p<0.05）。
　　5. Western

7、blot：在7天、14天和28天各時間點，與NI組相比，10 HI組Nrf2， Keap1，Srx和Prx3蛋白表達(dá)無明顯變化（p>0.05）；100 HI組Nrf2，Srx和Prx3蛋白表達(dá)顯著增高（p<0.05），而Keap1在100 HI組顯著降低（p<0.05）。
　　6.免疫熒光：免疫熒光結(jié)果顯示，在7天、14天和28天100 HI組，Nrf2在細(xì)胞核中強(qiáng)表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1.100 HI攝入后大鼠體內(nèi)