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文檔簡介
1、目的:運用RT-PCR及掃描電鏡探討新型的微型鈦網(micro-TW,TW)支架材料誘導兔骨髓間充質干細胞(bone marrow stromalcells,BMSCs)成骨分化的能力,以期為骨缺損修復重建提供良好的支架材料。
方法:采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法以及percoll液密度梯度離心法相結合,成功分離培養(yǎng)兔骨髓間充質干細胞。通過成骨誘導分化及成脂誘導分化證明目的細胞具備多向分化能力,從而鑒定獲得的細胞為兔骨髓間充質干細胞。取
2、第三代細胞接種于六孔板中,實驗組加入微型鈦網支架+普通培養(yǎng)基,對照組加入成骨誘導培養(yǎng)基,空白組加入普通培養(yǎng)基,14 d后應用RT-PCR檢測細胞堿性磷酸酶(ALP)、骨橋蛋白(OPN)、骨鈣素(OCN) mRNA的表達水平,以2^(-△△CT)法計算基因表達的相對比值,并通過掃描電鏡觀察細胞在微型鈦網支架上的長入、粘附及形態(tài)。
結果: RT-PCR檢測出實驗組堿性磷酸酶(ALP)、骨橋蛋白(OPN)、骨鈣素(OCN) mRNA
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