ITSN2-L與RABEP1的相互作用及功能研究.pdf

1、人ITSN(intersectin)蛋白是一類在胞漿中分布的連接蛋白(adaptor protein)，在細(xì)胞的胞吞胞吐、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、受體降解和細(xì)胞生存中起著重要作用?，F(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)兩個ITSN同源蛋白——ITSN1和ITSN2，ITSN1和ITSN2又分別有一個短的和長的異構(gòu)體ITSNl-S、ITSN2-S、ITSNl-L和ITSN2-L。ITSN-S廣泛表達(dá)于人的各種組織和細(xì)胞，ITSN-L則主要在神經(jīng)組織中表達(dá)。研究表明，ITSN能夠參

2、與胞吞胞吐作用，在神經(jīng)元細(xì)胞中對維持神經(jīng)遞質(zhì)的釋放起重要作用，此外ITSN還參與細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)通路的調(diào)節(jié)。
　　 本文用酵母雙雜交的方法篩選得到10個與ITSN2-L的CC結(jié)構(gòu)域相互作用的蛋白，我們選擇了重復(fù)數(shù)最多的，克隆并表達(dá)了RABEP1基因，并證實了RABEP1蛋白與ITSN2-L能夠在體外相互作用，而且免疫共沉淀的結(jié)果表明在HeLa細(xì)胞系中過表達(dá)的ITSN2-L與RABEP1蛋白能夠處于同一復(fù)合體中，同時發(fā)現(xiàn)HeLa細(xì)胞

3、系中，內(nèi)源、外源表達(dá)的ITSN2-L蛋白與RABEP1有明顯的共定位。結(jié)果表明這兩種蛋白能相互作用，通過這樣的結(jié)合完成復(fù)雜的調(diào)節(jié)功能。
　　 本文還對ITSN2-L與RABEP1蛋白的功能進(jìn)行了初步探索，發(fā)現(xiàn)ITSN2-L過表達(dá)可以導(dǎo)致RABEP1蛋白通過蛋白酶體途徑降解，而抑制ITSN2-L的表達(dá)時，RABEP1蛋白則有所升高；而且，ITSN2-L的過表達(dá)對RABEP1過表達(dá)所產(chǎn)生的巨大囊泡有抑制作用。這些結(jié)果說明，ITSN2