甲胺磷、甲拌磷在犬體內(nèi)的死后再分布研究.pdf

1、目的:
　　 1.建立甲胺磷、甲拌磷在灌胃染毒犬體內(nèi)死后再分布的同體(動物)模型；
　　 2.研究甲胺磷、甲拌磷在犬體內(nèi)的死后再分布規(guī)律,觀察是否存在位置依賴和時間依賴的死后濃度變化,為甲胺磷及甲拌磷中毒死亡案件的法醫(yī)學(xué)鑒定提供實驗依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.甲胺磷在犬體內(nèi)的死后再分布研究:取犬4只,隔夜禁食,隨機分為實驗組(3只)和對照組(1只)。實驗組犬,按8LD50甲胺磷(7.4mg／kg)灌胃

2、。對照組犬,以相同的方法以等量生理鹽水灌胃,各對應(yīng)組織器官樣品為空白對照。待實驗組犬心跳和呼吸等生命體征全部消失時,迅速解剖動物,分別取心血、周圍血、肝臟、腦和右后肢肌肉,并于死后不同時間(2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h、96h、120h、144h)在同一尸體取心血、肝臟、腦和右后肢肌肉,按方法3提取,檢測其中甲胺磷含量。
　　 2.甲拌磷在犬體內(nèi)的死后再分布研究:取犬4只,隔夜禁食,隨機分為實驗組(3只)和對

3、照組(1只)。實驗組犬,按40LD50(0.7mg／kg)甲拌磷灌胃。對照組犬,以相同的方法以等量生理鹽水灌胃,各對應(yīng)組織器官樣品為空白對照。待實驗組犬心跳和呼吸等生命體征全部消失時,迅速解剖動物,分別取心血、周圍血、肝臟、腦和右后肢肌肉,并于死后不同時間(2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h、96h)在同一尸體取心血、肝臟、腦和右后肢肌肉,按方法3提取,檢測其中甲拌磷含量。
　　 3.提取和檢測:按照本課題組所建立

4、的生物檢材中甲胺磷及甲拌磷的檢測方法,生物樣本經(jīng)二氯甲烷萃取,氣相色譜和氣相色譜／質(zhì)譜聯(lián)用檢測,分別根據(jù)甲胺磷、甲拌磷的特征離子峰、保留時間定性與內(nèi)標法、工作曲線法定量。
　　 4.采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件處理實驗數(shù)據(jù),結(jié)果以均數(shù)±標準差(X)±S表示。
　　 結(jié)果:
　　 1.癥狀:實驗組犬:8LD50甲胺磷灌胃后,約28.0±2.5min出現(xiàn)嘔吐、流涎、瞳孔縮小、呼吸道分泌物增多、肌束震顫、抽搐、大小便失

5、禁等癥狀,灌胃后約75.0min死亡；40LD50甲拌磷灌胃后,約17.0±2.8min出現(xiàn)嘔吐、流涎、瞳孔縮小、呼吸道分泌物增多、肌束震顫、抽搐、大小便失禁等癥狀,灌胃后約30.0min死亡；對照組犬:兩組實驗的對照組均無中毒癥狀。
　　 2.GC和GC／MS檢測
　　 2.1甲胺磷GC／MS定性分析中,甲胺磷m／z特征離子碎片為126、111、94。GC定量分析中,甲胺磷的保留時間為4.681min,內(nèi)標磷酸三丁酯的

6、保留時間為7.239min。甲胺磷在心血和肝組織中的回歸方程、線性檢測范圍、最低檢出濃度分別為Y血=0.0347X+0.0184(R2=0.994)、0.8-64μg／mL、0.1μg／mL；Y肝=0.0422X-0.0202(R2=0.998)、0.8-64.0μg／g、0.1μg／g。
　　 2.2甲拌磷GC／MS定性分析中,甲拌磷m／z特征離子碎片為231、121、97、75。GC定量分析中,甲拌磷的保留時間為8.037m

7、in,內(nèi)標磷酸三丁酯的保留時間為7.349min。甲拌磷在心血和肝組織中的回歸方程、線性檢測范圍、最低檢出濃度分別為Y血=0.6374X-0.0705(R2=0.9992)、0.1.10μg／L、0.01μg／mL；Y肝=0.8178X-0.1448(R2=0.9990)、0.1-10.0μg／g、0.012μg／g。
　　 3.甲胺磷死后再分布:8LD50甲胺磷在灌胃致死犬心血和組織中的濃度呈升高趨勢。死亡當時心血中甲胺磷含量

8、高于周圍血,心血與周圍血甲胺磷濃度比(C心血／C周圍血)達1.77；心血中甲胺磷含量在死后4h之內(nèi)穩(wěn)定,8h-144h內(nèi)顯著升高(P<0.05),死后與死亡當時心血甲胺磷濃度比(C死后血／C死亡當時血)達1.81～2.09；肝臟中甲胺磷含量在12h之內(nèi)穩(wěn)定,24h-144h內(nèi)顯著升高(P<0.05),死后與死亡當時肝臟甲胺磷濃度比(C死后肝／C死亡當時肝)達1.22～1.70；腦組織中甲胺磷含量在8h-48h內(nèi)顯著升高(P<0.05),

9、死后與死亡當時腦甲胺磷濃度比(C死后腦／C死亡當時腦)達1.23～1.54；肌肉中甲胺磷含量變化不明顯(P>0.05)。
　　 4.甲拌磷死后再分布:40LD50甲拌磷在灌胃致死犬心血和組織中的濃度呈升高趨勢。死亡當時心血中甲拌磷含量高于周圍血,心血與周圍血甲拌磷濃度比(C心血／C周圍血)達1.24；心血中甲拌磷含量在死后8h之內(nèi)穩(wěn)定,12h-24h內(nèi)顯著升高(P<0.05),死后與死亡當時心血甲拌磷濃度比(C死后血／C死亡當時

10、血)達1.23～1.34；肝臟中甲拌磷含量在24h之內(nèi)穩(wěn)定,48h-96h內(nèi)顯著升高(P<0.05),死后與死亡當時肝臟甲拌磷濃度比(C死后肝／C死亡當時肝)達1.27～1.44；在染毒犬死后96h內(nèi),肌肉和腦組織中甲拌磷含量變化不明顯(P>0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.本實驗采用8LD50甲胺磷、40LD50甲拌磷灌胃,建立了甲胺磷、甲拌磷在灌胃染毒犬體內(nèi)死后再分布的同體(動物)模型,可應(yīng)用于甲胺磷、甲拌磷中毒

11、(死)的法醫(yī)毒物動力學(xué)研究。
　　 2.8LD50甲胺磷中毒死亡犬死亡當時心血與周圍血甲胺磷濃度比達1.77,死后與死亡當時心血甲胺磷濃度比可達1.81～2.09,死后與死亡當時肝和腦甲胺磷濃度比達1.22～1.70和1.23～1.54,肌肉中甲胺磷含量變化不大。提示甲胺磷在染毒致死犬體內(nèi)存在死后位置依賴的血濃度變化和死后時間依賴的血與臟器濃度變化,可發(fā)生死后再分布,肌肉受影響較小。
　　 3.40LD50甲拌磷中毒死亡

12、犬死亡當時心血與周圍血甲拌磷濃度比達1.24,死后與死亡當時心血甲拌磷濃度比可達1.23～1.34,死后與死亡當時肝甲拌磷濃度比達1.27～1.44,腦和肌肉中含量變化不大。提示甲拌磷在染毒致死犬體內(nèi)存在死后位置依賴的血濃度變化和死后時間依賴的血與臟器濃度變化,可發(fā)生死后再分布,肌肉和腦組織受影響較小。
　　 4.較大劑量甲胺磷(8LD50)、甲拌磷(40LD50)在犬體內(nèi)均可發(fā)生死后再分布。甲胺磷、甲拌磷中毒(死)案件法醫(yī)學(xué)鑒