氧化樂果的法醫(yī)毒物動力學(xué)(二)——氧化樂果在犬體內(nèi)的死后再分布和分解動力學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　 1.建立氧化樂果在犬體內(nèi)的死后再分布、保存檢材和埋葬尸體中的分解動力學(xué)研究動物模型；
　　 2.研究氧化樂果在犬體內(nèi)的死后再分布、保存檢材和埋葬尸體中的分解動力學(xué)規(guī)律，為氧化樂果中毒死亡案件的法醫(yī)學(xué)鑒定提供實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.死后再分布
　　 健康犬4只，隔夜禁食，隨機分為實驗組（3只）和對照組（1只）。實驗組犬，按20LD50氧化樂果灌胃。觀察動物反應(yīng)，待實驗組犬心

2、跳和呼吸等生命體征全部消失時，于死后不同時間(0h、2h、6h、12h、24h、48h、72h、96h、120h)在同一尸體取心血、肝臟、腦和右后肢肌肉。二氯甲烷提取，GC/MS、GC-FPD法定性定量檢測其中的氧化樂果含量；對照組犬，以相同的方法以等量生理鹽水灌胃，各對應(yīng)組織器官樣品為空白對照。
　　 2.保存檢材中分解動力學(xué)
　　 2.1.染毒犬血、肝中氧化樂果分解動力學(xué)：健康犬3只，隔夜禁食，20LD50氧化樂果灌

3、胃，觀察動物反應(yīng)，待心跳和呼吸等生命體征全部消失時，立即解剖，取其心血和肝臟。將每只犬的心血和肝臟分四等份，其中三份血和肝分別置于20℃、4℃、-20℃保存，另一份心血中加氟化鈉至1％，另一份肝臟加4％甲醛溶液固定，20℃保存；分別于實驗設(shè)計的時間點進行提取，GC/MS、GC-FPD法檢測其中氧化樂果含量，WinNonlin軟件擬合分解動力學(xué)方程，計算氧化樂果在不同保存條件下的分解半衰期。
　　 2.2.尸血中添加氧化樂果的分解

4、動力學(xué)：尸血1OOOmL，添加氧化樂果乳油5mL，超聲混勻后，分為四等份，其中三份分別置于20℃、4℃、-20℃保存；另一份添加氟化鈉至1％。分別于實驗設(shè)計的時間點提取檢材，GC/MS、GC-FPD法檢測其中氧化樂果含量，WinNonlin軟件擬合分解動力學(xué)方程，計算尸血中氧化樂果在不同保存條件下的分解半衰期。
　　 3.埋葬犬尸體中的分解動力學(xué)
　　 3.1.埋葬時間對埋葬尸體中氧化樂果分解動力學(xué)的影響：健康犬30只，

5、20LD50氧化樂果灌胃，染毒，犬死亡后，Od的立即解剖取材，其余犬裝入雙層塑料袋中，不封口，埋于太原市東山實驗基地，分別于埋葬后29d、59d、120d、200d、380d挖出后，解剖取材，GC/MS、GC-FPD法檢測其中氧化樂果含量。
　　 3.2.染毒劑量對埋葬尸體中氧化樂果分解動力學(xué)的影響：健康犬12只,5LD50、1OLD50、氧化樂果劑量分別灌胃染毒3只犬，20LD50劑量灌胃染毒6只，犬死亡后，裝入塑料袋中，埋于

6、實驗基地，于89d(5LD50)、89d(20LD50)、120d(1OLD50)、120d(20LD50)后挖出相應(yīng)劑量組犬各三只，解剖取材，用研磨法進行提取，GC/MS、GC-FPD法檢測其中氧化樂果含量。
　　 3.3.埋葬方式對埋葬尸體中氧化樂果分解動力學(xué)的影響：健康犬9只，20LD50氧化樂果灌胃，染毒，犬死亡后，隨機分為三組，分別裝入塑料袋、編織袋和木箱（棺材）中，埋于太原市東山實驗基地，75d后挖出，解剖取材，用研

7、磨法進行提取，GC/MS、GC-FPD法檢測其中氧化樂果含量。
　　 結(jié)果：
　　 1.死后再分布
　　 實驗組犬，死亡當(dāng)時以及死后120h，心血中氧化樂果含量均高于周圍血中氧化樂果含量，且C心血與C周圍血濃度比分別達1.87、1.10;在犬死亡后120h內(nèi)，心血中氧化樂果的含量在2h-12h呈顯著性降低(P＜0.05)，24h-72h內(nèi)顯著升高(P＜0.05)，死后與死亡當(dāng)時心血氧化樂果濃度比達1.20～1.3

8、2;肝臟中氧化樂果的含量在6h之內(nèi)穩(wěn)定，12h-48h內(nèi)顯著升高(P＜0.05)，死后與死亡當(dāng)時肝臟氧化樂果濃度比達1.47～1.62;肌肉中氧化樂果含量在48h內(nèi)穩(wěn)定，72h-120h內(nèi)顯著降低(p＜0.05)，腦組織中氧化樂果含量在犬死后120h內(nèi)無顯著性變化(P＞0.05)。
　　 2.保存檢材中的分解動力學(xué)
　　 2.1.染毒致死犬（血、肝）中氧化樂果的分解動力學(xué)
　　 不同條件保存血和肝中氧化樂果含量均

9、呈下降趨勢。犬血在20℃、20℃(l％NaF)、4℃、-20℃條件下保存第lOd、12h、23d、23d，其中的氧化樂果含量顯著下降至初始濃度的11.7±4.6％、8.1±1.6％、51.9±12.1％、69.2±26.9％(P＜0.05)；上述條件下保存至29d、60h、110d、110d，氧化樂果含量已下降至初始濃度的0.5±0.004％、0.5±0.O01％、3.0±O.1％、4.6±2.4％，20℃(1％NaF)保存血中氧化樂果

10、在72h已完全分解；犬肝在20℃、20℃（4％甲醛）、4℃、-20℃條件下保存第2d、lOd、lOd、23d，其中氧化樂果含量顯著下降至初始濃度的56.9±0.2％、25.4±6.8％、61.1±9.3％、52.1±9.6％(P＜0.05)；上述條件下保存至29d、110d、110d和110d，其中氧化樂果含量已下降至初始濃度的1.6±0％、2.7±0.7％、7.2±5.4％、10.4±1.5％，而20℃保存犬肝至31d時已檢測不到氧化

11、樂果。
　　 不同保存條件下，血和肝中氧化樂果均可發(fā)生不同程度的分解，其分解符合一級動力學(xué)過程，可用公式C(t)=C0e-αt+C1e-βt+C1e-βt或Ct=C0e-αt表示。犬血在20℃、-20℃以及犬肝在4℃保存條件下分解符合一級動力學(xué)一室模型，可用Ct=C0-αt，其分解半衰期（t1/2α）分別為4.5d、33.6d和30.2d;犬血在4℃、20℃(1％NaF)以及犬肝在20℃、-20℃、4％甲醛保存條件下分解符合一級

12、動力學(xué)二室模型，可用C(t)=C0e-αt+C1e-βt表示，其快速分解半衰期(t1/2α)和慢速分解半衰期(t1/2β)分別是28.2d、2.8d、2.3d、52.1d、2.6d和96.1d、14.2d、10.2d、41.2d、38.2d。根據(jù)公式C(t)=C0e-αt+C1e-βt或Ct=C0e-αt計算的各樣本中氧化樂果含量理論值與實測值接近。
　　 2.2.保存尸血中氧化樂果的分解動力學(xué)
　　 尸血中添加氧化樂果

13、含量在不同保存條件下均呈下降趨勢。20℃、20℃(1％NaF)、4℃、-20℃條件下保存第8d、6h、13d、18d，其中的氧化樂果含量顯著下降至初始濃度的88.5±5.7％、39.7±O.9％、49.8±4.5％、41.6±6.6％(P＜0.05);20℃、4℃、-20℃條件下保存第57d，氧化樂果含量已分別下降至初始濃度的0.59±O.1％、20.8±3.5％、24.3±6.4％。；而20℃(1％NaF)條件下保存第78h，已檢測不

14、到氧化樂果。
　　 20℃、20℃(1％NaF)和-20℃保存條件下，氧化樂果分解符合一級動力學(xué)一室開放模型，可用公式Ct=C0e-αt表示，其分解半衰期(t1/2α)分別為6.6d、lOh和28.8d。4℃保存條件下的分解符合一級動力學(xué)二室開放模型，可用公式Ct=C0e-αt+C1e-βt表示，其快速分解半衰期(tl/2α)和慢速分解半衰期(tl/2β)分別是4.7d和63.9d，
　　 3.埋葬尸體中的分解動力學(xué)

15、r>　　 20LD50灌胃致死犬埋葬尸體在埋葬后59d內(nèi)，測得膽汁中氧化樂果含量呈先降低后升高再降低趨勢，心血中氧化樂果含量無顯著性變化，其余體液臟器中藥物含量均呈下降趨勢。在埋葬后120d、200d、380d僅胃組織中可檢測到少量氧化樂果，其余組織中均未檢出。
　　 不同染毒劑量的研究結(jié)果顯示：犬在埋葬后89d時,5LD50和20LD50劑量組各臟器中均未檢出氧化樂果：1OLD50和20LD50劑量組犬在埋葬后120d，僅在

16、20LD50劑量組犬的胃組織中檢出少量的氧化樂果，而兩組的其他組織臟器中均未檢出氧化樂果。
　　 不同埋葬方式研究結(jié)果顯示，埋葬75d時，木箱（棺材）包裝犬尸體內(nèi)心臟、肝臟、腎臟、骨骼肌、胸肌和胃組織中氧化樂果含量顯著高于塑料袋和編制袋包裝犬體內(nèi)氧化樂果含量（P＜0.05）；塑料袋包裝犬尸體內(nèi)肝臟、腎臟和胃組織中氧化樂果含量顯著高于編織袋包裝犬體內(nèi)氧化樂果含量(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.本實驗采用

17、20LD50氧化樂果灌胃染毒和尸體血添加氧化樂果，建立了氧化樂果的死后再分布同體（動物）模型、保存檢材和埋葬尸體中的分解動力學(xué)異體動物（研究）模型，可應(yīng)用于氧化樂果中毒（死）的法醫(yī)學(xué)鑒定和法醫(yī)毒物動力學(xué)的實驗研究。
　　 2.20LD50染毒致死犬，在死亡當(dāng)時以及死后120h，心血中氧化樂果含量均高于周圍血中氧化樂果含量；在犬死亡后120h內(nèi)，心血、肝臟和肌肉中氧化樂果的含量發(fā)生了顯著性變化，而腦組織中氧化樂果含量無顯著性變化。

18、氧化樂果在犬體內(nèi)存在位置依賴的血濃度變化和時間依賴的血與臟器濃度變化，可發(fā)生死后再分布。在氧化樂果中毒（死）案件分析中，應(yīng)考慮死后再分布對死后藥物濃度的影響，檢材采取時除血液、肝臟、胃內(nèi)容物等常規(guī)檢材外，還應(yīng)取腦組織等受死后再分布影響較小的組織進行檢測。
　　 3.不同保存條件下，染毒犬血、犬肝中氧化樂果以及尸體血中添加的氧化樂果均可發(fā)生分解。保存條件不同，分解速率不同。實驗結(jié)果表明：低溫保存以及固體組織用甲醛固定均可抑制細胞的

19、腐敗，從而延緩氧化樂果的分解速度，使分解半衰期延長；添加抑菌劑1％NaF后，保存環(huán)境成堿性，而氧化樂果在堿性環(huán)境下分解速度加快。犬血在20℃(1％NaF)保存至72h，就已檢測不到氧化樂果，而尸血中添加氧化樂果20℃(1％NaF)保存至78h也已檢測不到氧化樂果。在氧化樂果中毒法醫(yī)學(xué)檢驗中，所取檢材應(yīng)盡快送檢，如不能及時送檢，應(yīng)低溫保存，或固體檢材放置于4％甲醛溶液中保存，但液體檢材中不能添加抑菌劑NaF。
　　 4.染毒犬血、

20、犬肝中的氧化樂果以及尸血中添加氧化樂果在不同保存條件下分解符合一級動力學(xué)一室或二室開放模型，可用公式Ct=C0e-αt+C1e-βt或Ct=C0e-αt表示，根據(jù)此方程計算的理論值與實際值符合情況良好，可采用公式和分解動力學(xué)參數(shù)推斷取材當(dāng)時體內(nèi)的氧化樂果含量。
　　 5.20LD50氧化樂果灌胃致死犬埋葬尸體中氧化樂果含量呈下降趨勢，且分解較快。在埋葬后120d、200d、380d僅可在胃內(nèi)容中檢測到少量氧化樂果；染毒劑量對氧化

21、樂果分解的影響受取材時限的影響，高劑量染毒犬尸體內(nèi)在較長時間仍可檢出氧化樂果。埋葬方式對埋葬尸體犬中氧化樂果的分解也有影響，編織袋埋葬方式分解最快，塑料袋次之，木箱（棺材）最慢。
　　 6.氧化樂果中毒（死）埋葬尸體法醫(yī)學(xué)鑒定時，應(yīng)根據(jù)埋葬時間、服毒劑量、埋葬方式等對尸體中氧化樂果分解的影響，結(jié)合服毒方式和生前搶救情況，綜合判斷尸體挖掘的價值和可能性，并及早進行尸體挖掘和檢測，全面取材進行毒物分析，并可分居其分解規(guī)律，充分考慮偶