黃顙魚金屬硫蛋白cDNA克隆及原核表達.pdf

1、金屬硫蛋白普遍存在于生物體內，具有低分子量、富含半胱氨酸、誘導性強等特點。金屬硫蛋白具有很強的金屬結合能力和氧化還原能力，在生物體內參與細胞內金屬水平的穩(wěn)態(tài)調節(jié)、重金屬解毒、清除自由基、抵抗電離輻射等，具有較強的生物學功能。
　　 本論文通過同源克隆和RACE等方法克隆了黃顙魚MT全長cDNA序列。該序列全長381kb，開放閱讀框(Open Reading Frame，ORF)長度為183bp，可以編碼60個氨基酸，推導的氨基酸

2、序列與其他已知魚類MT具有80％以上的相似性(identity)，序列比對和聚類分析表明黃顙魚MT與斑點叉尾鮰MT氨基酸序列相似性最高(91%)。理論分子量為6080Da。在其編碼的氨基酸序列中半胱氨酸(Cys)含量最高，占33.3%，其次是絲氨酸(Ser)占18.3%，賴氨酸(Lys)占11.67%，不含組氨酸和芳香族氨基酸。對其編碼的氨基酸序列進行分析發(fā)現(xiàn)該序列有脊椎動物金屬硫蛋白的保守序列模式cys-x-cys、cys-x-xcy

3、s和cys-x-cys-cys。在半定量試驗中，用β-actin基因做內參，用比較電泳條帶亮度比值得方式進行分析，表明MT會受到Cd2+的誘導表達并與其濃度相關，MT在肝臟中表達量相對較高。
　　 本論文采用基因重組技術，將黃顙魚MT基因重組入原核表達載體pMAL-c2x中，該載體含有一個麥芽糖結合蛋白(MBP)基因，便于融合蛋白表達后的純化。將重組質粒轉入Ecoli BL21中進行體外表達，SDS-PAGE分析表明，經IPTG