牛卵泡抑素cDNA的克隆及其原核表達(dá).pdf

1、卵泡抑素(Follistatin)是一種分泌蛋白,它可以拮抗TGF-beta(transforming growth factor,轉(zhuǎn)化生長因子)超家族中幾種成員的功能,包括Myostatin.Myostatin是目前所知的最強(qiáng)的肌肉抑制因子,Follistatin通過直接的蛋白結(jié)合而拮抗Myostatin對肌肉發(fā)育的抑制作用,表現(xiàn)出增肌效應(yīng).Follistatin的增肌效應(yīng)既包括數(shù)量肥大(肌纖維數(shù)量增多)也包括質(zhì)量肥大(肌纖維增粗).

2、Follistatin增肌效應(yīng)并非病態(tài)的肌肉增長,對其它的組織與器官亦無有害的影響,這在畜牧業(yè)的生產(chǎn)上對提高家畜的肉用性狀有著深廣的實(shí)用意義.為了與實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的對Myostatin的研究結(jié)合,該實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了牛Follistatin cDNA的克隆及原核表達(dá).該實(shí)驗(yàn)從牛的卵巢中用Trizol提取總RNA,并通過RT-PCR(反轉(zhuǎn)錄PCR)的方法擴(kuò)增獲得Follistatin cDNA.經(jīng)正反測序表明其與GenBank中發(fā)表的牛Follist

3、atin cDNA序列完全相同.將獲得的Follistatin cDNA基因克隆入原核表達(dá)載體pET-30a中,組裝成了原核表達(dá)載體pET-30a-fs2,經(jīng)正反測序表明其閱讀框正確.將這個(gè)表達(dá)載體轉(zhuǎn)化入大腸桿菌表達(dá)菌株BL21(DE3)中,IPTG誘導(dǎo)培養(yǎng)后,經(jīng)SDS-PAGE和Western雜交實(shí)驗(yàn)檢測可知特異性表達(dá)帶約在44KD的位置,其表達(dá)量大約占細(xì)菌總蛋白的30﹪左右.Follistatin今后可能會用于治療人類肌肉性疾病,以