烏鱧和斑鱧微衛(wèi)星開發(fā)及在F1代謝鑒定與群體遺傳多樣性分析中的應(yīng)用.pdf

1、烏鱧(Channaargus)和斑鱧(Channamaculata)同屬鱧科魚類，是重要的淡水經(jīng)濟魚類。近年來，由于對野生烏鱧和斑鱧種質(zhì)資源保護重視程度不夠，造成烏鱧和斑鱧野生資源急劇下降。為了保護和合理挖掘利用烏鱧和斑鱧的種質(zhì)資源，實現(xiàn)烏鱧養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，烏鱧和斑鱧的種質(zhì)資源研究勢在必行。本研究用磁珠富集法分離獲得烏鱧和斑鱧的微衛(wèi)星標記(SSR)，并將這些標記用于烏鱧和斑鱧自交與雜交F1代進行了初步鑒定和對烏鱧群體的遺傳多樣性和系

2、統(tǒng)進化研究，以期為我國烏鱧和斑鱧種質(zhì)資源挖掘、保護和創(chuàng)新利用提供重要的理論基礎(chǔ)。主要包括下列內(nèi)容：
　　 1.烏鱧和斑鱧微衛(wèi)星的開發(fā)
　　 采用生物素-磁珠吸附微衛(wèi)星富集法，分離烏鱧和斑鱧的微衛(wèi)星分子標記。經(jīng)MseⅠ內(nèi)切酶酶切后選取200-500bp大小的片段，采用(CA)15為探針，與pGEM-T載體連接后轉(zhuǎn)化到大腸桿菌(Escherichiacoli)DH5a感受態(tài)細胞。結(jié)果在篩選的274個白色菌落中，經(jīng)測序分別獲得

3、微衛(wèi)星序列165個和82個。165個烏鱧微衛(wèi)星序列中，完美型125個(76％)、非完美型34個(20％)和混合型6個(4％)；74個斑鱧微衛(wèi)星DNA序列中，完美型48個(65％)、非完美型16個(21％)和混合型10個(14％)。除探針中使用的CA重復(fù)外，還得到TG、AG、TAG、GTT、TCTG、AAAG、CTGG等的重復(fù)序列。引物的設(shè)計采用Primer3在線設(shè)計或Primer5.0。
　　 2.烏鱧和斑鱧F1代的初步鑒定

4、r>　　 用62對引物(烏鱧和斑鱧各31對)對烏鱧和斑鱧F1代的4個組合[烏鱧(♀)×烏鱧(♂)、烏鱧(♀)×斑鱧(♂)、斑鱧(♀)×烏鱧(♂)、斑鱧(♀)×斑鱧(♂)]DNA進行擴增，10對引物無擴增產(chǎn)物，其余52對引物中，均能在4個組合的魚中擴增出條帶的引物有49對引物。位點CHA16在烏鱧中呈多態(tài)，在斑鱧中呈單態(tài)；位點CHM23在烏鱧中呈單態(tài)，在斑鱧中呈現(xiàn)多態(tài)；另外，位點CHM24在烏鱧中呈單態(tài)，在斑鱧中沒有擴增出條帶。檢測到烏

5、鱧和斑鱧的差異位點22個，其中有18個均可單獨有效鑒定出F1子代的烏鱧、斑鱧及包括正交和反交在內(nèi)的雜交鱧，其余4個位點也可以通過組合鑒定出F1子代的烏鱧、斑鱧及雜交鱧。但是，雜交鱧中正交組合和反交組合不能通過本研究開發(fā)的微衛(wèi)星鑒別。
　　 3.烏鱧、斑鱧及雜交鱧[斑鱧(♀)×烏鱧(♂)]的微衛(wèi)星分析
　　 采用10對微衛(wèi)星引物對烏鱧、斑鱧及雜交鱧[斑鱧(♀)×烏鱧(♂)]進行微衛(wèi)星分析，3個群體的平均等位基因數(shù)、平均觀察

6、雜合度、平均期望雜合度和多態(tài)信息含量最高的均為烏鱧，其次是雜交鱧，斑鱧最低。發(fā)現(xiàn)3個群體分別有30％的位點顯著偏離了Hardy-Weinberg平衡或極顯著偏離了Hardy-Weinberg。根據(jù)三種魚間的遺傳距離，采用UPGMA法構(gòu)建它們之間的聚類分析圖。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雜交鱧遺傳特征偏向母本斑鱧。
　　 4.4個野生烏鱧群體的遺傳多樣性分析
　　 采用10對微衛(wèi)星DNA標記對山東微山湖(SD)、江西鄱陽湖(JX)、湖南洞庭

7、湖(HN)及浙江錢塘江(ZJ)4個烏鱧群體的遺傳多樣性進行分析，4個烏鱧群體的平均期望雜合度在0.4805-0.9482之間；觀測雜合度在0.4333-1.0000之間；不同引物獲得的等位基因數(shù)為3-26；PIC值在0.0017-1.0000之間。發(fā)現(xiàn)4個群體共有7.5％的位點極顯著偏離了Hardy-Weinberg。基于DA遺傳距離，用UPGMA法構(gòu)建的聚類圖，湖南洞庭湖烏鱧群體與浙江錢塘江烏鱧群體聚在一起，山東微山湖烏鱧群體與江西鄱