PKGII對(duì)胃癌細(xì)胞VEGFR2介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響及分子機(jī)制.pdf

1、研究目的：
　　研究II型cGMP依賴(lài)性蛋白激酶（Type II cGMP dependent protein kinase, PKG II）對(duì)人胃癌細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2（Vascular endothelial growth factor receptor2, VEGFR2）介導(dǎo)的主要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及生物學(xué)效應(yīng)的影響，探討其相關(guān)的分子機(jī)制。
　　研究方法：
　　用編碼PKG II cDNA的腺病毒（Ad-PKG

2、II）感染胃癌細(xì)胞株HGC-27和AGS細(xì)胞，使其高表達(dá)PKG II，并用特異性激動(dòng)劑8-pCPT-cGMP激活PKG II，用血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-A（vascular endothelial growth factor A, VEGF-A）激活VEGFR2，進(jìn)行如下檢測(cè)：采用Western Blot方法檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)和磷酸化水平；采用MTT法、Transwell法、Annexin V-FITC/PI法和Matrigel血管生成實(shí)驗(yàn)分別

3、檢測(cè)細(xì)胞增殖、遷移、凋亡及新生血管形成；采用免疫共沉淀法檢測(cè)PKG II與VEGFR2之間的相互作用；采用免疫沉淀法聯(lián)合Western Blot法檢測(cè)PKG II對(duì)VEGFR2絲/蘇氨酸的磷酸化作用；采用位點(diǎn)突變法將VEGFR2的393位蘇氨酸（Thr393）、439位蘇氨酸（Thr439）和1231位絲氨酸（Ser1231）突變成丙氨酸，進(jìn)而研究PKG II作用于VEGFR2的特異性磷酸化位點(diǎn)。
　　研究結(jié)果：
　　1.

4、PKG II阻斷VEGF-A引起的胃癌細(xì)胞VEGFR2酪氨酸磷酸化/活化，并抑制VEGF-A/VEGFR2介導(dǎo)的ERK1/2、MEK、Akt和mTOR的磷酸化/活化。
　　2. PKG II抑制VEGF-A的促細(xì)胞增殖、遷移和血管生成作用及抗細(xì)胞凋亡作用。
　　3. PKG II與VEGFR2相互結(jié)合，使其發(fā)生絲/蘇氨酸磷酸化。
　　4. PKG II磷酸化VEGFR2的Thr439和Ser1231位點(diǎn)，進(jìn)而阻斷VEG

5、F-A對(duì)VEGFR2的激活。
　　研究結(jié)論：
　　PKG II通過(guò)結(jié)合VEGFR2并使其Thr439和Ser1231位點(diǎn)發(fā)生磷酸化，進(jìn)而阻斷VEGF-A對(duì)VEGFR2的激活，抑制VEGF-A/VEGFR2啟動(dòng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，最終抑制 VEGF-A/VEGFR2誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞的增殖和遷移；PKG II對(duì)VEGF-A/VEGFR2誘導(dǎo)的新生血管形成也有抑制作用，并拮抗VEGF-A/VEGFR2的抗凋亡效應(yīng)。結(jié)果初步闡明PKG II為