抑制Hedgehog信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、Hedgehog信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是一個(gè)經(jīng)典的控制胚胎發(fā)育的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，在胚胎發(fā)育和胚胎形成后細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化過(guò)程中都起著重要的作用。 Hedgehog 信號(hào)通路控制著細(xì)胞的生長(zhǎng)與增殖，而腫瘤的發(fā)生正是一個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖失控的過(guò)程。目前大量的研究表明，Hedgehog 信號(hào)通路的異常激活與腫瘤發(fā)生有關(guān)，很多參與腫瘤細(xì)胞增殖、擴(kuò)散的效應(yīng)分子（如n-Myc 、EGF 、CyclinD、CyclinE、CyclinB、BMP 等）被證明是H

2、edgehog 信號(hào)通路的靶基因或下游分子，此外Hedgehog 信號(hào)通路與很多已知調(diào)控細(xì)胞分化增殖的其他信號(hào)通路（如Notch、Wnt 等）還有交叉作用。因此，研究Hedgehog信號(hào)通路對(duì)于探明腫瘤的發(fā)生和發(fā)展從而有針對(duì)性地進(jìn)行治療具有重要的意義。 在哺乳動(dòng)物的Hedgehog 信號(hào)通路中，多種基因已經(jīng)被鑒定為原癌基因或腫瘤抑制基因，在這些基因中，Ptch1、Smo、Shh、Gli1 和Gli2 與皮膚癌特別是基底細(xì)胞癌的發(fā)

3、生有關(guān)。因?yàn)槿橄偈且环N源于皮膚的器官，所以乳腺癌與皮膚癌的發(fā)生可能存在一種內(nèi)在聯(lián)系。對(duì)于基底細(xì)胞癌的研究已經(jīng)比較深入，但是關(guān)于Hedgehog 信號(hào)通路與乳腺癌發(fā)生的關(guān)系的研究還比較少。 Cyclopamine 是Hedgehog 信號(hào)通路特異性抑制劑，因?yàn)樗軌蛑苯幼饔糜谠撏分械腟MO，從而抑制Hedgehog 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活性。既往的研究表明，cyclopamine 可顯著抑制多種因該信號(hào)通路過(guò)度激活所致的腫瘤生長(zhǎng),并可

4、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,用cyclopamine 抑制Hedgehog 信號(hào)通路來(lái)研究該通路在腫瘤中的作用目前已經(jīng)得到國(guó)際公認(rèn)。本研究就是利用cyclopamine 作用于人乳腺癌細(xì)胞系Bcap-37 和MDA-MB-231，通過(guò)觀察cyclopamine 對(duì)人乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和凋亡的影響，來(lái)對(duì)Hedgehog 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與乳腺癌發(fā)生的關(guān)系進(jìn)行初步探討，從而為闡明Hedgehog 信號(hào)通路在乳腺癌發(fā)病及治療中的作用奠定基礎(chǔ)。 本實(shí)驗(yàn)

5、采用光鏡觀察、MTT 比色試驗(yàn)、BrdU 摻入試驗(yàn)和流式細(xì)胞儀測(cè)定的方法觀察cyclopamine 對(duì)人乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和凋亡的影響。 研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)cyclopamine對(duì)乳腺癌細(xì)胞Bcap-37和MDA-MB-231的生長(zhǎng)和增殖具有明顯的抑制作用并能促進(jìn)其凋亡： 1. 在光鏡下細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了明顯的變化：細(xì)胞立體感消失，細(xì)胞內(nèi)空泡增多，部分細(xì)胞變小變圓，細(xì)胞間隙不明顯，說(shuō)明細(xì)胞的生長(zhǎng)受到了抑制。 2. MTT

6、試驗(yàn)的結(jié)果則顯示10-7～10-5mol/L的cyclopamine可以劑量依賴性地抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，并且5×10-6mol/L的cyclopamine對(duì)乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用也隨時(shí)間的延長(zhǎng)而趨于明顯。 3. BrdU摻入試驗(yàn)的結(jié)果表明，加入5×10-6mol/L的cyclopamine處理組的BrdU摻入陽(yáng)性細(xì)胞明顯減少，可見(jiàn)cyclopamine能顯著抑制Bcap-37和MDA-MB-231細(xì)胞的DNA合成。