豬成體神經(jīng)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)的研究.pdf

1、神經(jīng)干細(xì)胞用于神經(jīng)學(xué)臨床修復(fù)和基礎(chǔ)理論研究的前提是首先完成神經(jīng)干細(xì)胞的體外分離、培養(yǎng)、純化并大量擴(kuò)增。鼠、人中都已成功分離出神經(jīng)干細(xì)胞并已嘗試用于動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)損傷等疾病的治療,盡管在鼠和人上的研究很多,相對(duì)于鼠神經(jīng)干細(xì)胞在神經(jīng)學(xué)臨床應(yīng)用上的局限和人神經(jīng)干細(xì)胞在材料來源上的不便,豬作為神經(jīng)干細(xì)胞臨床應(yīng)用和基礎(chǔ)研究的模式動(dòng)物有很大的潛力。成體神經(jīng)干細(xì)胞在細(xì)胞替代療法的研究和應(yīng)用中具有廣闊的前景。成體神經(jīng)干細(xì)胞移植不僅可以避免應(yīng)用胚胎神經(jīng)干細(xì)

2、胞進(jìn)行細(xì)胞替代治療所帶來的倫理問題,而且還可解決由異體或異種移植而導(dǎo)致的免疫排斥問題,使臨床應(yīng)用成為可能。目前,豬成體神經(jīng)干細(xì)胞系尚未被建立起來。
　　 本研究旨在探索如何從成豬腦組織中分離培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞,觀察神經(jīng)干細(xì)胞生長(zhǎng)特性和體外增殖的特點(diǎn)。主要的實(shí)驗(yàn)方法和實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 第一部分:選取適用于人或/和鼠的4種培養(yǎng)體系篩選適用于豬的成體神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)條件。結(jié)果表明無血清的懸浮或貼壁培養(yǎng)條件不適用于原代分離豬成體

3、神經(jīng)干細(xì)胞,只有完全培養(yǎng)液中含有血清的DMEM/F12+10％FBS+20ng/mlbFGF+20ng/mlhEGF+103U/mlLIF培養(yǎng)體系支持豬成體神經(jīng)干細(xì)胞的存活和增殖。
　　 第二部分:選取3月齡成豬腦室下區(qū)(SVZ)、海馬齒狀回顆粒細(xì)胞下區(qū)(SGZ)、嘴側(cè)遷移通路(RMS)、海馬角(HH)4個(gè)腦區(qū)分離培養(yǎng)成體神經(jīng)干細(xì)胞,檢測(cè)可以分離出豬成體神經(jīng)干細(xì)胞的部位。結(jié)果表明4個(gè)區(qū)域均含有成體神經(jīng)干細(xì)胞,可進(jìn)行原代分離,但無