葉酸修飾的羥基喜樹堿聚合物膠束聯(lián)合放療對(duì)宮頸癌的協(xié)同抑制作用研究.pdf

1、目的：探討葉酸修飾的負(fù)載羥基喜樹堿(hydroxycamptothecin，HCPT)的聚合物膠束聯(lián)合放療對(duì)宮頸癌皮下移植瘤模型的協(xié)同抑制作用及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：以兩親性嵌段聚合物單甲氧基聚乙二醇-聚己內(nèi)酯(methoxy poly(ethylene glycol)-poly(caprolactone)，MPEG-PCL)為原料，通過(guò)丙烯酰氯引入碳碳雙鍵后，與葉酸(folate，F(xiàn)A)共價(jià)結(jié)合，制備出目標(biāo)聚合物MPEG-PC

2、L-FA。然后，以MPEG-PCL-FA聚合物為載體材料，通過(guò)自主裝包載羥基喜樹堿形成聚合物膠束（HCPT/MPEG-PCL-FA，HFOL）;并考察其形貌、粒徑分布及體外釋藥特性。采用噻唑藍(lán)(methylthiazoletetrazolium，MTT)試驗(yàn)和熒光顯微鏡分別研究此膠束的體外細(xì)胞毒性和細(xì)胞攝取功能。體內(nèi)建立宮頸癌裸鼠皮下移植瘤模型，隨機(jī)分為6組:NS組、HCPT組、單純放療組(radiotherapy, RT)、HCPT+

3、RT組、HMEP(HCPT/MPEG-PCL)+RT組及HFOL+RT組。腫瘤再生長(zhǎng)延遲時(shí)間(tumor growth delay，TGD)和中位生存期用于評(píng)價(jià)膠束聯(lián)合放療的抗腫瘤療效。氟代脫氧葡萄糖(fluorine-18-deoxyglucose，18F-FDG)小動(dòng)物PET/CT顯像用于評(píng)價(jià)移植瘤對(duì)膠束聯(lián)合放療的早期治療效應(yīng)。此外，HFOL膠束的放療增敏機(jī)制研究分別通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布、末端標(biāo)記法（TdT-mediate

4、d dUTP nick end labeling，TUNEL）檢測(cè)細(xì)胞凋亡和免疫組化檢測(cè)磷酸化組蛋白λ-H2AX(histone H2AXphosphorylation，λ-H2AX)的表達(dá)。
　　結(jié)果：該研究制備的HFOL膠束呈球形，平均流體動(dòng)力學(xué)直徑為132 nm，無(wú)明顯的突發(fā)釋放，并呈現(xiàn)出緩慢釋藥的特點(diǎn)。MTT結(jié)果顯示HFOL膠束的細(xì)胞毒性明顯高于普通膠束，其作用可能與葉酸受體(folate receptor，F(xiàn)R)介導(dǎo)的內(nèi)

5、吞作用有關(guān)。體內(nèi)研究結(jié)果表明，HFOL+RT組的TGD及中位生存時(shí)間分別為45天及83.5天，明顯高于對(duì)照組及非靶向膠束組(p＜0.01)。小動(dòng)物PET/CT顯像結(jié)果示:NS、HMEP+RT、HFOL+RT組的T/M值分別為:2.529±0.157，1.522±0.043，1.129±0.389(p＜0.01)。λ-H2AX陽(yáng)性指數(shù)(positive index，PI):HFOL+RT＞HMEP+RT＞HCPT+RT＞RT＞HCPT＞N

6、S組。與NS組相比，HFOL+RT組和HMEP+RT組的細(xì)胞比例在G2/M期升高，S期降低(p＜0.01);TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞比例:65.8±3.1％和51.2±4.3％，明顯高于對(duì)照組(p＜0.01)。
　　結(jié)論：葉酸修飾的負(fù)載羥基喜樹堿的聚合物膠束具有對(duì)宮頸癌細(xì)胞的主動(dòng)特異性靶向功能，聯(lián)合放療對(duì)宮頸癌移植瘤具有明顯增強(qiáng)的抗腫瘤作用，其協(xié)同機(jī)制可能與該載藥膠束誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞凋亡，G2/M期阻滯和增加λ-H2AX的表達(dá)有關(guān)。同時(shí)表