葉酸修飾的羥基喜樹堿聚合物膠束聯(lián)合放療對宮頸癌的協(xié)同抑制作用研究.pdf

1、目的：探討葉酸修飾的負載羥基喜樹堿(hydroxycamptothecin，HCPT)的聚合物膠束聯(lián)合放療對宮頸癌皮下移植瘤模型的協(xié)同抑制作用及其相關(guān)機制。
　　方法：以兩親性嵌段聚合物單甲氧基聚乙二醇-聚己內(nèi)酯(methoxy poly(ethylene glycol)-poly(caprolactone)，MPEG-PCL)為原料，通過丙烯酰氯引入碳碳雙鍵后，與葉酸(folate，F(xiàn)A)共價結(jié)合，制備出目標聚合物MPEG-PC

2、L-FA。然后，以MPEG-PCL-FA聚合物為載體材料，通過自主裝包載羥基喜樹堿形成聚合物膠束（HCPT/MPEG-PCL-FA，HFOL）;并考察其形貌、粒徑分布及體外釋藥特性。采用噻唑藍(methylthiazoletetrazolium，MTT)試驗和熒光顯微鏡分別研究此膠束的體外細胞毒性和細胞攝取功能。體內(nèi)建立宮頸癌裸鼠皮下移植瘤模型，隨機分為6組:NS組、HCPT組、單純放療組(radiotherapy, RT)、HCPT+

3、RT組、HMEP(HCPT/MPEG-PCL)+RT組及HFOL+RT組。腫瘤再生長延遲時間(tumor growth delay，TGD)和中位生存期用于評價膠束聯(lián)合放療的抗腫瘤療效。氟代脫氧葡萄糖(fluorine-18-deoxyglucose，18F-FDG)小動物PET/CT顯像用于評價移植瘤對膠束聯(lián)合放療的早期治療效應。此外，HFOL膠束的放療增敏機制研究分別通過流式細胞儀檢測細胞周期分布、末端標記法（TdT-mediate

4、d dUTP nick end labeling，TUNEL）檢測細胞凋亡和免疫組化檢測磷酸化組蛋白λ-H2AX(histone H2AXphosphorylation，λ-H2AX)的表達。
　　結(jié)果：該研究制備的HFOL膠束呈球形，平均流體動力學直徑為132 nm，無明顯的突發(fā)釋放，并呈現(xiàn)出緩慢釋藥的特點。MTT結(jié)果顯示HFOL膠束的細胞毒性明顯高于普通膠束，其作用可能與葉酸受體(folate receptor，F(xiàn)R)介導的內(nèi)

5、吞作用有關(guān)。體內(nèi)研究結(jié)果表明，HFOL+RT組的TGD及中位生存時間分別為45天及83.5天，明顯高于對照組及非靶向膠束組(p＜0.01)。小動物PET/CT顯像結(jié)果示:NS、HMEP+RT、HFOL+RT組的T/M值分別為:2.529±0.157，1.522±0.043，1.129±0.389(p＜0.01)。λ-H2AX陽性指數(shù)(positive index，PI):HFOL+RT＞HMEP+RT＞HCPT+RT＞RT＞HCPT＞N

6、S組。與NS組相比，HFOL+RT組和HMEP+RT組的細胞比例在G2/M期升高，S期降低(p＜0.01);TUNEL陽性細胞比例:65.8±3.1％和51.2±4.3％，明顯高于對照組(p＜0.01)。
　　結(jié)論：葉酸修飾的負載羥基喜樹堿的聚合物膠束具有對宮頸癌細胞的主動特異性靶向功能，聯(lián)合放療對宮頸癌移植瘤具有明顯增強的抗腫瘤作用，其協(xié)同機制可能與該載藥膠束誘導宮頸癌細胞凋亡，G2/M期阻滯和增加λ-H2AX的表達有關(guān)。同時表