結(jié)核分枝桿菌的DNA復(fù)制起始因子相互作用的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、分類號(hào)密級(jí):華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)核分枝桿菌的DNA復(fù)制起始因子相互作用的研究TheinteraetionsbetweenDNArePlieationinitiatorsin龍tycobacteriumtuberculesis研究生:指導(dǎo)教師:謝運(yùn)昌何正國(guó)教授專業(yè):微生物學(xué)獲得學(xué)位名稱:理學(xué)碩士研究方向:提交論文時(shí)間:分子微生物學(xué)2009年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院二00九年六月結(jié)核分枝桿菌的DNA復(fù)制起始因子之間的相互作用

2、研究1.1供試菌株.........................................................................................……191.2酶、試劑和試劑盒....................................................................……:…191.3供試抗生素.........................

3、...........................................................……191.4引物及寡核營(yíng)酸............................................................................……201.5供試質(zhì)粒............................................................

4、............................……211.6其余緩沖液、試劑........................................................................……221.7培養(yǎng)基.............................................................................................……

5、242方法...........................................................................................................……252.1分子生物學(xué)基本操作....................................................................……252.2細(xì)菌雙雜交實(shí)驗(yàn)..........

6、..................................................................……252.2.1雙雜交篩選培養(yǎng)基的配制.................................................……252.2.2細(xì)菌雙雜交質(zhì)粒的構(gòu)建.....................................................……252.2.3互作篩選

7、.............................................................................……262.3融合蛋白的親和純化....................................................................……262.3.1表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與轉(zhuǎn)化........................................

8、.............……262.3.2誘導(dǎo)與預(yù)處理.....................................................................……262.3.3含有6His融合標(biāo)簽蛋白的親和純化................................……272.3.4含有GST融合標(biāo)簽的親和純化........................................……

9、272.3.5蛋白的透析.........................................................................……282.3.6Bradfd測(cè)定蛋白質(zhì)濃度...................................................……282.4大分子相互作用檢測(cè)..............................................

10、......................……282.4.1蛋白Pull一Down...................................................................……282.4.2West的blothng檢測(cè)...........................................................……292.4.3SPR檢測(cè)蛋白互作與核酸蛋白互作....

11、..............................……302.4.4瓊脂糖凝膠阻滯遷移分析(EMSA)....................................……30第三章結(jié)果與分析.............................................................................................……311細(xì)菌雙雜交文庫(kù)篩選及相互作用蛋白的鑒

12、定.......................................……311.1MthDnaB與MthDnaEZ基因的克隆.............................................……311.2篩選結(jié)果及分析............................................................................……31ZMthDnaA與MthD

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