唐草片對(duì)注射絲裂霉素小鼠造血功能的保護(hù)作用.pdf

1、背景與目的：
　　 化療是目前臨床治療惡性腫瘤的主要手段之一，由于化療藥物的選擇性低，故其在抑制或殺滅腫瘤細(xì)胞的同時(shí)必然會(huì)損傷正常細(xì)胞，對(duì)人體正常細(xì)胞特別是增殖旺盛的細(xì)胞同樣具有強(qiáng)大的殺傷作用。所以，在臨床中應(yīng)用抗腫瘤藥物化療后最常見而且比較嚴(yán)重的不良反應(yīng)是骨髓抑制，從而引起白細(xì)胞減少甚至全血細(xì)胞減少;其危害首先累及粒細(xì)胞系，其次為血小板、紅細(xì)胞;此外，細(xì)胞及體液免疫功能，生理防御屏障功能均可受到累及。嚴(yán)重時(shí)影響化療的正常進(jìn)行而

2、不得不推遲用藥、減量或停藥，導(dǎo)致化療失敗。因此從某種意義上來說，如何減輕化療后骨髓抑制是化療成功與否的關(guān)鍵所在。尋找能夠防治骨髓抑制的藥物和方法顯得極為重要。目前，在防治化療過程中所致骨髓抑制的方法有:口服升白藥，如鯊肝醇、利血生、維生素B4之類，但是其升白作用較差;再者就是輸注成分血或進(jìn)行造血干細(xì)胞移植，但這兩種方法治療重復(fù)性差且不能廣泛使用。當(dāng)前新型的升白藥物有:基因重組人紅細(xì)胞生成素、白細(xì)胞介素-11、基因重組人粒細(xì)胞集落刺激因子

3、、血小板生成素、基因重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子等。這些藥物療效有限，而且價(jià)格昂貴。因此，尋找具有骨髓保護(hù)、減輕化療藥物毒性、提高患者生存質(zhì)量的藥物具有非常重要的意義。
　　 “唐草片”是首個(gè)國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)用于治療艾滋病的純中藥新藥。中藥唐草片的組成成分多，包括石榴皮、金銀花、糯稻根、瓜蔞皮、柴全蝎等二十多味中藥。因其各成分所包含的化合物種類結(jié)構(gòu)多樣性，產(chǎn)生作用的靶點(diǎn)非常多?，F(xiàn)代藥理研究和臨床研究表明唐草片具有明

4、確的抑制HIV病毒復(fù)制、修復(fù)損傷的免疫細(xì)胞、提高機(jī)體免疫功能、抗氧化清除自由基、延緩艾滋病的進(jìn)程、保護(hù)肝臟、防御患者的機(jī)會(huì)性感染、升高CD4+T淋巴細(xì)胞等作用。唐草片升高CD4+T淋巴細(xì)胞的作用是減少CD4+T細(xì)胞的破壞，還是促進(jìn)再生或兩者兼而有之，其機(jī)制目前并不清楚，但提示其有促進(jìn)白細(xì)胞恢復(fù)的作用。如果唐草片具有升高白細(xì)胞的作用，可以對(duì)抗其他藥物治療方案的不良反應(yīng)，提高治療的綜合療效，增加唐草片的適應(yīng)癥，擴(kuò)大應(yīng)用范圍，充分顯示中藥的治

5、療優(yōu)勢。因此唐草片是否具有促進(jìn)造血細(xì)胞再生或保護(hù)骨髓造血功能的作用，非常值得探討。
　　 方法：
　　 1.升高白細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組和劑量:昆明種健康小鼠根據(jù)體重隨機(jī)分為6組，每組10只。分為正常對(duì)照組、模型組、陽性藥對(duì)照組、模型+唐草片低劑量組、模型+唐草片中劑量組、模型+唐草片高劑量組，唐草片低、中、高劑量依次為0.5g/kg、1.0g/kg、2.0g/kg體重，唐草片用藥灌胃5天后，小鼠腹腔注射絲裂霉素3mg/kg一次，

6、五天后再注射絲裂霉素2mg/kg一次。唐草片連續(xù)灌服21天，正常對(duì)照組、模型組灌服等量生理鹽水，陽性藥對(duì)照組在模型成功后皮下注射重組人粒細(xì)胞集落刺激因子50μg/kg，不同時(shí)間取尾靜脈血測定血細(xì)胞數(shù)，直到模型組動(dòng)物白細(xì)胞升高至或接近正常水平。分別在給藥前和給藥后不同時(shí)間稱量動(dòng)物體重;
　　 2.骨髓細(xì)胞集落培養(yǎng)和計(jì)數(shù):在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)用安死術(shù)處死小鼠，無菌取一側(cè)股骨骨髓細(xì)胞，嚴(yán)格按照說明書操作，培養(yǎng)14天后分別計(jì)數(shù)紅細(xì)胞爆式集落生成

7、單位(CFU-E)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落生成單位(CFU-GM)、粒細(xì)胞-紅細(xì)胞-巨噬細(xì)胞-巨核細(xì)胞集落生成單位(CFU-GEMM)數(shù)量等。取另一側(cè)股骨，按常規(guī)沖出骨髓細(xì)胞，計(jì)數(shù)有核細(xì)胞數(shù)。
　　 3.荷瘤動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組和劑量:動(dòng)物根據(jù)體重隨機(jī)分為5組，每組6只。分為正常對(duì)照組、荷瘤動(dòng)物組、荷瘤動(dòng)物+唐草片（1.0g/kg體重）中劑量組、荷瘤動(dòng)物+唐草片（1.0g/kg體重）中劑量組+絲裂霉素（5.0mg/kg體重）組、荷瘤動(dòng)物+

8、絲裂霉素（5.0mg/kg體重）組。預(yù)防應(yīng)用唐草片5天，分別給小鼠皮下和腹腔接種鼠S180肉瘤細(xì)胞（107/只），接種瘤細(xì)胞第二天應(yīng)用化療藥物絲裂霉素5.0mg/kg治療一次。唐草片連續(xù)給藥共18天。皮下接種瘤細(xì)胞的動(dòng)物唐草片連續(xù)給藥共18天后，動(dòng)物稱重、取尾靜脈血后處死，剖取瘤體、胸腺、脾臟稱重，計(jì)算抑瘤率和胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)。腹腔接種瘤體的動(dòng)物唐草片連續(xù)給藥共18天后，動(dòng)物稱重、取尾靜脈血測定外周血細(xì)胞數(shù)等變化，繼續(xù)觀察動(dòng)物的死亡情

9、況。
　　 4.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±s）表示，應(yīng)用SPSS10.0分析軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用多個(gè)樣本均數(shù)比較的單因素方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，取P＜0.05為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.外周血白細(xì)胞數(shù)的變化:第一次注射絲裂霉素后18天（模型建成第八天），各組白細(xì)胞數(shù)有所回升，但明顯低于對(duì)照組;第24天時(shí)，唐草片中、低劑量組和陽性對(duì)照組白細(xì)胞數(shù)明顯高于模型對(duì)照組(p＜0.05)，達(dá)到正

10、常對(duì)照組水平;第33天時(shí)治療組仍然維持在較高的正常對(duì)照組水平，模型對(duì)照組還低于正常水平(p＜0.05)。第40天時(shí)，唐草片中劑量組、陽性對(duì)照組的白細(xì)胞已經(jīng)開始下降，唐草片低劑量組仍然維持在較高的水平。第47天時(shí)模型對(duì)照組白細(xì)胞才恢復(fù)到正常水平，唐草片治療組白細(xì)胞數(shù)的恢復(fù)比模型對(duì)照組提前23天恢復(fù)至正常水平。
　　 2.中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞數(shù)的變化:中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞數(shù)的變化趨勢和外周血白細(xì)胞數(shù)的變化趨勢大體一致。
　　

11、 3.外周血紅細(xì)胞數(shù)的變化:在化療后的前24天，各用藥組紅細(xì)胞數(shù)升高并不明顯，甚至低于正常對(duì)照組水平，但第33天以后，低劑量唐草片組紅細(xì)胞數(shù)高于模型組，一直持續(xù)到實(shí)驗(yàn)結(jié)束，結(jié)果提示唐草片有促進(jìn)紅細(xì)胞數(shù)恢復(fù)的作用。
　　 4.骨髓細(xì)胞數(shù)和骨髓細(xì)胞培養(yǎng)后集落數(shù)的變化:各組骨髓有核細(xì)胞數(shù)差別不大，只有唐草片低劑量組較低，為每根3.0×1010個(gè)，其他組在每根5.5×1011～6.5×1011個(gè)之間。
　　 唐草片低劑量組紅系、

12、粒單核系集落細(xì)胞數(shù)和中劑量組CFU-GEMM集落數(shù)高于模型對(duì)照組(p＜0.05)，提示唐草片促進(jìn)造血功能的恢復(fù)，可能和它促進(jìn)造血干/祖細(xì)胞增殖分化作用有關(guān)。
　　 5.動(dòng)物體重的變化:動(dòng)物體重在化療后10天，普遍低于正常對(duì)照組，但和化療之前比較并沒有明顯降低。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中動(dòng)物體重有逐漸增加的趨勢。
　　 6.唐草片對(duì)絲裂霉素抗腫瘤作用的影響:皮下接種瘤細(xì)胞的荷瘤組，瘤體膨大，中間有水樣液體，絲裂霉素組以及唐草片和絲裂霉

13、素聯(lián)合組瘤體小，中間無水樣液體。唐草片、絲裂霉素單獨(dú)作用對(duì)S180肉瘤的抑制作用不明顯，但聯(lián)合兩者在動(dòng)物體內(nèi)抑制率達(dá)43.3％。對(duì)接種的腹水瘤的動(dòng)物，荷瘤對(duì)照組動(dòng)物43天已全部死亡，絲裂霉素單獨(dú)治療組中一只動(dòng)物出現(xiàn)腹水并死亡，絲裂霉素和唐草片聯(lián)合組動(dòng)物全部存活，雖未見唐草片的增強(qiáng)作用，但也未見拮抗作用。
　　 7.唐草片對(duì)荷瘤動(dòng)物血細(xì)胞數(shù)的影響:實(shí)體瘤小鼠外周血中多種血細(xì)胞數(shù)唐草片和絲裂霉素聯(lián)合組低于其他組，原因不明。而腹水瘤小