雷帕霉素在輻射引起的小鼠造血系統(tǒng)損傷中的保護(hù)作用.pdf

1、目的：
　　探討雷帕霉素（Rapamycin，Rap）預(yù)處理對(duì)電離輻射引起的小鼠造血系統(tǒng)損傷是否有保護(hù)作用。
　　方法：
　?。?）將C57BL/6小鼠分為未輻射組和輻射處理組，每組又分對(duì)照組和雷帕霉素預(yù)處理組。輻射組小鼠接受60Coγ射線5 Gy輻射，雷帕霉素預(yù)處理組小鼠輻射處理前腹腔注射雷帕霉素4 mg/kg，隔天注射一次，共五次。取未輻射組和輻射各處理組小鼠外周血，通過全血分析儀檢測(cè)各時(shí)間段（第0.5，1，2，3

2、，5，7，15，30，40，70，100天）小鼠外周血白細(xì)胞（WBC），淋巴細(xì)胞（LYM），紅細(xì)胞（RBC），血小板（PLT）和血紅蛋白（HGB）的變化，分析輻射處理和雷帕霉素處理對(duì)外周血各指標(biāo)的影響，并分析輻射后外周血各指標(biāo)變化趨勢(shì)。
　?。?）取未輻射組和輻射后第6和12小時(shí)的小鼠股骨和脛骨骨髓單個(gè)核細(xì)胞，通過流式細(xì)胞分析儀和Western Blotting檢測(cè)對(duì)照組和雷帕霉素處理組單個(gè)核細(xì)胞損傷標(biāo)志蛋白γ-H2AX聚集，并通

3、過Western Blotting檢測(cè)損傷修復(fù)途徑-同源末端修復(fù)（HR）和非同源末端連接修復(fù)（NHEJ）關(guān)鍵蛋白R(shí)ad50和DNA Lig4表達(dá)量的變化。
　?。?）取輻射處理后30天的骨髓細(xì)胞，低滲處理獲得染色體，分析對(duì)照組和雷帕霉素處理組細(xì)胞染色體形態(tài)變化。
　　（4）取未輻射和輻射后（第1，5，15，30天）的對(duì)照組和雷帕霉素處理組小鼠胸骨，HE染色觀察骨髓腔內(nèi)的有核細(xì)胞分布及有核細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞比例，血管結(jié)構(gòu)的變化。

4、
　?。?）取輻射后第15天的對(duì)照組和雷帕霉素組小鼠肝組織，HE染色觀察肝結(jié)構(gòu)的變化，并取脾臟，用 Tellyesniczky固定液處理觀察全脾臟表面結(jié)節(jié)數(shù)，分析內(nèi)源性集落生成能力差異。
　?。?）取5 Gy輻射后4小時(shí)內(nèi)的對(duì)照組和雷帕霉素組小鼠骨髓細(xì)胞，尾靜脈注射至10 Gy致死劑量照射處理的受體小鼠，分析中位生存時(shí)間差異。
　?。?）將對(duì)照組和不同濃度雷帕霉素（1mg/Kg，4 mg/Kg，8 mg/Kg）預(yù)處理組

5、小鼠8.5 Gy劑量輻射處理后，比較30天內(nèi)小鼠中位生存時(shí)間差異。
　　結(jié)果：
　?。?）未輻射組：雷帕霉素處理組小鼠外周血白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞數(shù)降低，紅細(xì)胞及血紅蛋白升高，血小板無變化。輻射組：雷帕霉素預(yù)處理組，短期內(nèi)可以減緩輻射誘發(fā)的小鼠外周血紅細(xì)胞、血小板下降，增強(qiáng)白細(xì)胞輻射后的長(zhǎng)期恢復(fù)。
　?。?）未輻射組：雷帕霉素處理和對(duì)照組損傷標(biāo)志蛋白γ-H2AX不表達(dá)，同時(shí)對(duì)損傷修復(fù)蛋白R(shí)ad50和DNA Lig4的表達(dá)無影

6、響。輻射后：雷帕霉素預(yù)處理組損傷標(biāo)志蛋白γ-H2AX水平降低，輻射后6 h組雷帕霉素預(yù)處理組損傷修復(fù)蛋白R(shí)ad50和 DNA Lig4水平升高。
　?。?）輻射處理后30天，對(duì)照組小鼠骨髓細(xì)胞染色體形態(tài)觀察到染色體異?，F(xiàn)象（染色體斷裂和染色體間隙），而雷帕霉素處理組無染色體異常出現(xiàn)。
　?。?）輻射前和輻射后不同時(shí)間段小鼠胸骨HE染色發(fā)現(xiàn)，未輻射組，雷帕霉素處理不影響有核細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞比例，靜脈結(jié)構(gòu)完整，紅細(xì)胞有序分布靜脈

7、竇內(nèi)；輻射處理后，對(duì)照組和雷帕霉素處理組在輻射后短期內(nèi)均出現(xiàn)有核細(xì)胞減少，紅細(xì)胞增多，靜脈結(jié)構(gòu)消失，紅細(xì)胞紊亂分布，輻射后15天開始，有核細(xì)胞逐漸恢復(fù)，紅細(xì)胞減少，靜脈結(jié)構(gòu)重現(xiàn)，但在對(duì)照組有核細(xì)胞恢復(fù)速度明顯慢于雷帕霉素處理組，并且對(duì)照組出現(xiàn)紅細(xì)胞惡性增殖的現(xiàn)象。
　　（5）未輻射組，雷帕霉素處理不影響肝組織的結(jié)構(gòu)；輻射處理后第15天，對(duì)照組小鼠出現(xiàn)明顯的肝細(xì)胞水腫現(xiàn)象，而雷帕霉素處理組肝細(xì)胞水腫程度明顯輕于對(duì)照組；對(duì)第15天的脾

8、臟表面集落計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，雷帕霉素處理組脾集落明顯高于對(duì)照組。
　?。?）將輻射后對(duì)照組和雷帕霉素處理組的小鼠骨髓細(xì)胞對(duì)致死劑量輻射小鼠立即進(jìn)行骨髓移植，觀察小鼠存活時(shí)間，結(jié)果表明，雷帕霉素預(yù)處理可一定程度延緩致死劑量輻射小鼠的死亡時(shí)間。
　?。?）對(duì)照組與不同濃度雷帕霉素處理組小鼠30天存活曲線表明，當(dāng)腹腔注射濃度為4mg/Kg時(shí)，能延緩致死劑量照射引起的小鼠死亡。
　　結(jié)論：
　?。?）輻射前雷帕霉素預(yù)處理可以