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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:1)對(duì)心肌梗死病人和對(duì)照組人群的SIRT3基因啟動(dòng)子序列進(jìn)行遺傳學(xué)分析,找出SIRT3基因啟動(dòng)子序列變異和心肌梗死之間的關(guān)系。
2)運(yùn)用熒光素酶報(bào)告基因載體pGL3-Basic,檢測(cè)SIRT3基因啟動(dòng)子序列變異的功能學(xué)變化。本研究擬為分子水平上預(yù)測(cè)心肌梗死發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)提供理論基礎(chǔ),并為心肌梗死的預(yù)防和治療靶點(diǎn)提供新的方向。
方法:采用大樣本和病例對(duì)照研究,其中MI病人319例,正常對(duì)照322例。采用PCR方法對(duì)SI
2、RT3基因啟動(dòng)子序列進(jìn)行擴(kuò)增,直接DNA測(cè)序后進(jìn)行分析,以發(fā)現(xiàn)心肌梗死病人和對(duì)照組人群中SIRT3基因啟動(dòng)子的DNA序列變異情況。將SIRT3基因啟動(dòng)子構(gòu)建入pMDR19-T載體進(jìn)行擴(kuò)增,然后再插入pGL3-Basic載體,與pRL-TK轉(zhuǎn)染H9c2細(xì)胞和HEK-293細(xì)胞,測(cè)量雙熒光素酶活性,通過(guò)對(duì)比分析DNA序列變異對(duì)SIRT3基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響。
結(jié)果:本研究發(fā)現(xiàn)23個(gè)DNA序列變異(DSVs),包括10個(gè)單核苷酸
3、多態(tài)性(SNPs)。我們?cè)贛I病人組中,發(fā)現(xiàn)6個(gè)為新穎雜合DSVs,g.237307A>G,g.237270G>A, g.237023_25del, g.236653C>A, g.236628G>C, g.236557T>C,和兩個(gè)SNPs,g.237030C>T(rs12293349)和g.237022C>G(rs369344513)。但是,這些DNA序列變異在對(duì)照組中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)。我們還發(fā)現(xiàn)三個(gè)SNPs,g.236473C>T(rs11
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