低氧啟動(dòng)子調(diào)控下VEGF-,165-基因修飾的EPCs誘導(dǎo)大鼠急性心肌梗死后血管新生.pdf

1、目的：
　　 目前的研究發(fā)現(xiàn)外源性VEGF165基因可以促進(jìn)缺血組織血管新生，而多拷貝缺氧反應(yīng)元件（Hypoxic Response Element，HRE）可以對(duì)VEGF165基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控減少其副作用；此外，多種形式的干/祖細(xì)胞也可以改善缺血組織的功能；然而多拷貝HRE調(diào)控VEGF165基因修飾的干細(xì)胞對(duì)缺血心肌中治療性血管新生的作用目前仍不清楚。本研究通過(guò)把6HRE調(diào)控的VEGF165基因轉(zhuǎn)染入內(nèi)皮祖細(xì)胞中，來(lái)研究這種

2、新的基因修飾的內(nèi)皮祖細(xì)胞對(duì)心肌梗死后缺血心肌中血管發(fā)生以及對(duì)心肌梗死后心臟功能的治療作用。
　　 方法：
　　 首先用分子生物學(xué)技術(shù)成功構(gòu)建r6HRE-CMV-VEGF165重組質(zhì)粒和rCMV-VEGF165重組質(zhì)粒，并對(duì)體外分離培養(yǎng)的大鼠骨髓來(lái)源內(nèi)皮祖細(xì)胞（Endothelial Progenitor Cells，EPCs）進(jìn)行免疫熒光法鑒定；然后用陽(yáng)離子脂質(zhì)體法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到EPCs中，并構(gòu)建體外細(xì)胞缺氧模型鑒定低

3、氧啟動(dòng)子的調(diào)控作用；隨后把基因修飾的EPCs通過(guò)尾靜脈注射法移植入成功建立的急性心肌梗死（Acute MyocardialInfraction，AMI）模型的Sprague-Dawley（SD）大鼠中，通過(guò)RT-PCR和Western1blot法檢測(cè)AMI后1w缺血心肌中VEGF165 mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，用免疫組化法和超聲心動(dòng)圖檢測(cè)AMI4w后大鼠缺血心肌中毛細(xì)血管密度和心臟功能。
　　 結(jié)果：
　　 1）陽(yáng)離

4、子脂質(zhì)體法可有效的將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入體外分離培養(yǎng)的骨髓來(lái)源大鼠EPCs；
　　 2）6HRE-CMV低氧啟動(dòng)子誘導(dǎo)VEGF165基因在體內(nèi)外缺氧時(shí)表達(dá)增強(qiáng)，而非缺氧下僅呈現(xiàn)低水平表達(dá)；
　　 3）r6HRE-CMV-VEGF165質(zhì)粒轉(zhuǎn)染EPCs移植組中大鼠AMI后1wVEGF165基因的表達(dá)水平以及4w缺血心肌中毛細(xì)血管密度明顯高于rCMV-VEGF165質(zhì)粒轉(zhuǎn)染EPCs移植組和EPCs移植組（P<0.05）；