玉米LEG基因啟動子克隆與功能分析.pdf

1、獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得安徽農業(yè)大學或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意?？冢瑢W位論文作者簽名：=塹叢簽字日期：扣，≯年易月歸學位論文版權使用授權書’本學位論文作者完全了解安徽農業(yè)大學有關保留、

2、使用學位論文的規(guī)定，有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子文件，允許論文被查閱和借閱。本人授權安徽農業(yè)大學可以將學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，收錄到《中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫》，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文，向社會公眾提供信息服務。(保密的學位論文在解密后適用本授權書)。學位論文作者簽名：拯簽字日期：扣f≯年』5月莎曰學位論文作者畢業(yè)后去向：工作單位：通信地址：指導教師簽名：簽字日期

3、：小陟年么月滬電話：郵編：摘要玉米作為世界上最大的糧食作物之一，種子中貯存著豐富的蛋白質、淀粉和脂肪，是人類食用植物蛋白的主要來源，在基因工程中可用作生物反應器，在醫(yī)療和工業(yè)領域中也具有重要研究價值。外源基因能否在植物細胞中定向、安全和高效表達是當前人們非常關注的問題，而解決這一問題的關鍵是獲得能使外源基因在特定組織和器官或特定發(fā)育階段表達的啟動子。啟動子作為重要的順式作用元件，能與不同的反式作用因子協(xié)調起作用，調控基因在特定組織和特定

4、階段表達。特異性啟動子在玉米中的研究，不僅對增加玉米產量和改良玉米品質有重要作用，而且為植物基因工程研究提供了重要的調控元件。本研究主要涉及對LEG基因啟動子及其缺失片段的表達載體的構建和功能分析，結果如下：(1)從玉米B73自交系基因組中克隆了一段1910bpLEG基因啟動子，以其為模板，通過5’端缺失法，獲得五段不同長度的缺失片段，分別命名為TLEGl、TLEG2、TLEG3、TLEG4和TLEG5，大小分別為1596bp、1312

5、bp、1000bp、703bp和360bp；將這六段啟動子分別與含有GUS報告基因的雙元表達載體pCAMBIAl301連接，構建六個新型的表達載體；(2)通過PLACE和PlantCARE網(wǎng)站分析，該啟動子除含有TATAbox和CAATbox基本元件外，還含有三種光應答元件：Box4、GAGmotif和Spl；七種誘導性元件：AuxRR—core、P—box、ABRE、CGTCA—motif、TGACGmotif、MBS和LTR；三種器

6、官表達元件：ROOTMOTIFTAPOXl、REALPHALGLHCB21和RAVlAAT；W1Box是一種WRKY蛋白結合位點；(3)以植物材料粳稻(OryzasativaLsubspjaponica)中花11號為試材，以愈傷組織為侵染對象，通過農桿菌介導法轉化將各載體到水稻細胞中。獲得60株轉基因株，分別為pLEG5株，TLEGl6株、TLEG2轉12株、TLEG314株、TLEG411株和T皿G514株，，通過PCR和Southe

7、m雜交檢測，共45株為陽性植株；(4)通過GUS組織化學染色驗證LEG基因啟動子只在愈傷組織細胞中表達，葉、莖、葉芽鞘、根、花、穎殼和種子均不表達；為了進一步了解其表達強度，對該啟動子T代愈傷組織進行GUS熒光活性檢測，以平均表達強度為標準，為非轉基因株的13倍之多，但略低于35S啟動子。篩減片段的GUS組織化學染色分析結果表明：TLEGl只在愈傷組織細胞中表達，其它各部位均不表達；TLEG2、TLEG3、TLEG4和TLEG5除在愈傷