PSG076啟動子啟動Barnase基因表達(dá)載體構(gòu)建及其遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、小麥?zhǔn)鞘澜绠a(chǎn)量第二的糧食作物，在人類生活中不可缺少，提高小麥產(chǎn)量是許多國家的重要課題。利用雄性不育使不同品種間的小麥雜交產(chǎn)生雜種優(yōu)勢是其中一個重要途徑。
　　花粉對于雄性配子的形成至關(guān)重要，在植物有性生殖過程中發(fā)揮重要作用。花粉特異性啟動子能夠調(diào)控花粉的正常發(fā)育。了解啟動子調(diào)控過程，研究植物雄性不育相關(guān)基因及形成的分子機(jī)制，有助于構(gòu)建植物雄性不育株系。在此基礎(chǔ)上，本論文先分離小麥花粉特異性啟動子，再使其表達(dá)細(xì)胞毒素基因，期望獲得小

2、麥雄性不育，達(dá)到潛在的應(yīng)用價值。具體研究過程如下：
　?。?）解淀粉芽孢桿菌中克隆長度為330bp的Barnase基因；小麥基因組中克隆長度為1.4kb的PSG076基因啟動子片段，在生物信息學(xué)方面分析該啟動子的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)，以及與花粉特異表達(dá)相關(guān)的作用元件。
　?。?）構(gòu)建PSG076::Barnase::Nos嵌合基因。利用pBI121和pMD18-T vector質(zhì)粒將PSG076和Barnase轉(zhuǎn)入至pUCG載體，構(gòu)

3、建成p14B表達(dá)載體，用于小麥遺傳轉(zhuǎn)化研究。
　?。?）采用基因槍轉(zhuǎn)化技術(shù)，將目標(biāo)載體p14B轉(zhuǎn)入小麥幼胚，經(jīng)過組織培養(yǎng)獲得再生小麥。對成熟小麥進(jìn)行PCR鑒定，檢測到2株Barnase基因陽性的小麥植株。
　?。?）后續(xù)的觀察中，陽性小麥植株的種子結(jié)實率與普通小麥相比沒有明顯改變，極有可能是Barnase基因的表達(dá)不會引起小麥表型的變化，對其分子水平研究則需進(jìn)一步分析。
　　小麥轉(zhuǎn)基因陽性植株的獲得為后續(xù)深入研究小麥花