基于iTRAQ技術(shù)對(duì)奶牛金黃色葡萄球菌人工誘導(dǎo)型乳腺炎差異表達(dá)蛋白質(zhì)分析.pdf

1、乳腺炎是奶牛場(chǎng)造成奶生產(chǎn)下降和巨大經(jīng)濟(jì)損失的一種復(fù)雜的奶牛疾病，嚴(yán)重地危害了奶牛業(yè)的健康發(fā)展，而金黃色葡萄球菌型乳腺炎是最嚴(yán)重的一種，治療成本大且難以治愈。目前仍未找到徹底解決的方法。
　　本研究利用金黃色葡萄球菌構(gòu)建中國(guó)荷斯坦奶牛乳腺炎疾病模型，采用iTRAQ技術(shù)結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，篩選與奶牛金黃色葡萄球菌型乳腺炎密切相關(guān)的差異表達(dá)蛋白，并進(jìn)行相關(guān)的GO和Pathway等功能分析，從而得到與奶牛乳腺炎相關(guān)的新型生物標(biāo)記分子，以期初

2、步從蛋白質(zhì)水平揭示奶牛乳腺炎的免疫調(diào)控機(jī)制。主要結(jié)果如下:
　　1.本實(shí)驗(yàn)成功的建立了奶牛臨床型金黃色葡萄球菌型乳腺炎疾病模型，感染后奶牛所表現(xiàn)的臨床癥狀及各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)（SCC，BMT等）結(jié)果，真實(shí)地反映了金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)奶牛乳腺炎的發(fā)病過(guò)程。
　　2.iTRAQ技術(shù)分析共篩選到168個(gè)差異蛋白（Fold change≥1.5或者≤0.667，P＜0.05），其中66個(gè)在金葡菌組表達(dá)上調(diào)，102個(gè)表達(dá)下調(diào)。生物信息學(xué)分析

3、發(fā)現(xiàn)有30個(gè)差異蛋白與乳腺組織的防御，免疫和炎癥反應(yīng)有關(guān)。
　　3.差異蛋白的GO富集分析發(fā)現(xiàn)，這些蛋白顯著富集到314條GO Term中(P＜0.05)。
　　4.結(jié)合KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)差異表達(dá)蛋白進(jìn)行Pathway富集分析，篩選到20條與防御，免疫和炎癥相關(guān)的通路。主要有:FC小量RI信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路、B細(xì)胞受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、鈣信號(hào)通路、Toll樣受體信號(hào)通路、自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用、血

4、管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、白細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移、造血細(xì)胞譜系、腸道免疫網(wǎng)絡(luò)的IgA生產(chǎn)、趨化因子信號(hào)通路、磷脂酰肌醇信號(hào)系統(tǒng)、細(xì)胞質(zhì)DNA的檢測(cè)途徑、FcγR-介導(dǎo)的吞噬作用、補(bǔ)體及凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)、T細(xì)胞受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、RIG-I樣受體信號(hào)通路、NOD樣受體信號(hào)通路、抗原加工和呈遞。進(jìn)一步對(duì)這些Pathway進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)圖分析，發(fā)現(xiàn)了12個(gè)樞紐蛋白:預(yù)測(cè):血小板堿性蛋白、間α胰蛋白酶抑制物重鏈H3前體(IHIH3)、熱休克蛋白β-1(HSPB

5、1)、熱休克70KDa蛋白1A(HSPA1A)、核因子NF-k-B P105亞基(NFKB1)、脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)、Ras相關(guān)C3肉毒素底2前體(RAC2)、預(yù)測(cè):copine-3亞型X1、isochcrismatase結(jié)構(gòu)域蛋白1(ISOC1)、未鑒定的蛋白Loc524810前體(LOC524810)、整合素a-M前體(ITGAM)、整合素β-2前體(ITGB2)?？梢猿醪綄⑦@些關(guān)鍵蛋白作為乳腺炎抗性選擇的候選蛋白進(jìn)行深入的研究