奶牛金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)型臨床乳腺炎的病理特征及初步免疫組化研究.pdf

1、乳腺炎是奶牛場最為常見的疾病之一，主要由微生物感染引起。本研究通過乳頭管灌注金黃色葡萄球菌（以下簡稱金葡菌）方法建立中國荷斯坦牛臨床性乳腺炎模型，通過臨床檢查、BMT檢測、SCC檢測、組織病理學(xué)技術(shù)等方法的檢測，結(jié)果表明成功構(gòu)建了金葡菌誘導(dǎo)型奶牛乳腺炎模型。在此基礎(chǔ)上，通過組織學(xué)、免疫印跡、免疫組化染色技術(shù)等方法初步研究了金葡菌誘導(dǎo)型乳腺炎乳腺組織PGLYRP1和PTX3蛋白的變化規(guī)律，研究了金葡菌誘導(dǎo)型乳腺炎的免疫相關(guān)蛋白調(diào)控。主要內(nèi)

2、容和結(jié)果如下:
　　1、為建立中國荷斯坦牛誘導(dǎo)型乳腺炎模型，將1×107CFU/mL的金黃色葡萄球菌懸液分別對3頭健康且處于泌乳中期奶牛的一個乳區(qū)進行乳頭管灌注，在攻菌6h、12h、18h、24h里，觀察奶牛精神狀況、產(chǎn)奶量、食欲、乳汁顏色、體溫等，并進行BMT檢測和乳中SCC測定，同時進行病理學(xué)檢查。結(jié)果表明:攻菌后奶牛精神萎靡不振、采食量降低、體溫升高，攻菌24h時感染乳區(qū)顏色變紅、腫脹、發(fā)熱、明顯觸痛等急性炎癥癥狀，乳樣顏色

3、灰白發(fā)黃、粘稠，產(chǎn)奶量降低，乳汁與BMT試劑反應(yīng)后顏色呈綠色或深綠色，搖動時呈膠凍狀，部分奶牛乳中SCC高達200萬/mL，攻菌24h后試驗乳區(qū)呈典型的臨床型乳腺炎癥狀，成功地建立了奶牛金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)型乳腺炎模型。
　　2、金葡菌誘導(dǎo)性乳腺炎病理特征:HE染色顯示金葡菌誘導(dǎo)型乳區(qū)其乳腺有明顯病變，局部視野可見乳腺間質(zhì)伴有明顯的炎性水腫和增生現(xiàn)象，大量嗜中性白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤。腺泡腔萎縮變形，乳腺上皮細(xì)胞連接不緊密，腺泡腔內(nèi)有

4、少量絮狀乳汁和大量分泌物，主要是脫落的乳腺上皮細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞。透射電鏡顯示試驗乳區(qū)乳腺組織中存在大量金葡菌，細(xì)菌周圍常常有初級溶酶體和次級溶酶體的聚集，乳腺上皮細(xì)胞細(xì)胞核、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體、細(xì)胞膜等均有明顯病理現(xiàn)象。細(xì)胞核出現(xiàn)不同程度的染色質(zhì)邊集現(xiàn)象，線粒體出現(xiàn)水腫、擴張現(xiàn)象，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕微擴張，網(wǎng)池內(nèi)出現(xiàn)包容物，細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)大量空泡，空泡內(nèi)有糖原、脂滴等內(nèi)容物。
　　3、Western blo

5、tting和免疫組化結(jié)果顯示:PGLYRP1和PTX3蛋白在對照組和感染組乳腺組織中都有表達，對照組和感染組乳腺組織的蛋白表達量存在明顯差異，PGLYRP1和PTX3蛋白在攻菌后蛋白表達量均顯著上調(diào)。PGLYRP1是分泌性蛋白，主要定位在嗜中性粒細(xì)胞細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中。PTX3蛋白也是分泌性蛋白，主要定位在巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞的細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中。
　　結(jié)論:奶牛乳腺炎模型是一種典型、易于建立的乳腺炎動物模型，可以為奶牛乳腺炎的免疫