沙門菌噬菌體的分離鑒定及在禽肉產(chǎn)品中的初步應(yīng)用.pdf

1、分類號(hào)UDC學(xué)號(hào)密級(jí)埸H1大譬YANGZHOUUNIVERSlTY碩士學(xué)位論文(全日制學(xué)術(shù)學(xué)位)沙門菌噬菌體的分離鑒定及在禽肉產(chǎn)品中的初步應(yīng)用許燕蘋指導(dǎo)教師姓名：筮塹圭塾籃：揚(yáng)劌盤鱟。婆菱塹必：22三QQ窆睦疊塾撞：揚(yáng)劌盤堂：望蒸揚(yáng)劌：22QQ窆申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：亟論文提交日期：2Q!墨魚旦學(xué)位授予單位：揚(yáng)劌盤堂答辯委員會(huì)主席：夔亞越學(xué)科專業(yè)名稱：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)論文答辯日期：2Q!墨生旦學(xué)位授予日期：2Q!墨生魚旦2018年6月2揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)

2、位論文宿主細(xì)菌進(jìn)行宿主譜初篩，噬菌體對(duì)雞白痢沙門菌、腸炎沙門菌、鼠傷寒沙門菌具有很好的裂解能力，陽性率達(dá)90％以上；其次傷寒沙門菌(869％)、德爾卑沙門菌(60％)、印第安納沙門菌(274％)、甲型副傷寒沙門菌(24％)；對(duì)羅森沙門菌、鴨沙門菌、火雞沙門菌、倫敦沙門菌、布倫登蘆普沙門菌、大腸桿菌以及單核細(xì)胞增生李斯特菌均不裂解，選取宿主譜較寬且裂解能力強(qiáng)的兩株噬菌體LP31、SP55進(jìn)行進(jìn)一步的研究。2沙門菌噬菌體的生物學(xué)特性研究及全

3、基因組分析噬菌體LP31經(jīng)純化后，噬菌斑清晰透亮，單斑直徑達(dá)41TILTl；對(duì)雞白痢沙門菌(59／61，97％)和腸炎沙門菌(100／104，96％)具有良好的裂解能力；最佳感染復(fù)數(shù)為001；對(duì)酸堿耐受范圍廣，在pH值4～11中可維持較好活性；在400C。600C的溫度下可穩(wěn)定存活；生長曲線表明潛伏期為10min，爆發(fā)期為90min，爆發(fā)量為23PFU／cell；噬菌體LP31屬于有尾病毒目長尾病毒科，具有正多面體的頭部和無收縮性的尾巴

4、，頭部直徑60nlTl、尾長110nm。噬菌體SP55單斑直徑3lilln；對(duì)雞白痢沙門菌(59／61，97％)和腸炎沙門菌(97／104，93％)同樣具有較強(qiáng)的裂解能力；最佳感染復(fù)數(shù)為O01；在pH4“10及溫度400C～600c的條件下下可穩(wěn)定存活；生長曲線表明潛伏期為10min，爆發(fā)期為80min，爆發(fā)量為40PFU／cell；噬菌體SP55屬于有尾病毒目長尾病毒科，具有正多面體的頭部和無收縮性的尾巴，頭部直徑5513112、尾長

5、120nlll。全基因組測序顯示噬菌體LP31基因組大小為42600bp(GC含量5033％)，包含57個(gè)開放閱讀框(OI心)、其中25個(gè)ORF已知功能或假定己知功能，剩余為假想蛋白表達(dá)序列；SP55基因組大小為42781bp(GC含量5028％)，基因組包含58個(gè)ORF，已知功能或假定已知功能有27個(gè)ORF，剩余為未知功能的假想蛋白表達(dá)序列。這些已知功能或者假定已知功能的基因分別屬于噬菌體復(fù)制轉(zhuǎn)錄模塊、噬菌體結(jié)構(gòu)和組裝模塊、裂解宿主菌

6、模塊。通過數(shù)據(jù)庫對(duì)比分析，兩株噬菌體均不攜帶編碼毒力或耐藥性相關(guān)的基因，表明兩株噬菌體具有實(shí)際應(yīng)用潛能。3沙門菌噬菌體在禽肉產(chǎn)品中的初步應(yīng)用分別對(duì)兩株噬菌體應(yīng)用于禽肉產(chǎn)品消減沙門菌(包括腸炎沙門菌和雞白痢沙門菌)的能力進(jìn)行評(píng)價(jià)。對(duì)噬菌體與宿主細(xì)菌相互作用進(jìn)行了最佳條件的摸索，結(jié)合食品在常溫條件下最長的儲(chǔ)存時(shí)間確定兩者的最佳互作時(shí)間為2h；對(duì)不同MOI值進(jìn)行摸索以及參考沙門菌實(shí)際污染情況的相關(guān)文獻(xiàn)，確定宿主菌與噬菌體的最佳互作濃度MOI=