兩株乳桿菌噬菌體的分離鑒定及抗噬菌體菌株的篩選.pdf

1、乳桿菌為乳、肉、飼料和蔬菜等發(fā)酵工業(yè)中十分重要的菌株，在發(fā)酵過程中能使乳酸迅速累積，產(chǎn)生產(chǎn)品風(fēng)味物質(zhì)，改良產(chǎn)品質(zhì)地。而乳桿菌噬菌體的普遍存在使發(fā)酵過程迅速減慢或完全終止，給發(fā)酵業(yè)帶來了巨大危害。為有效防治乳桿菌噬菌體污染，本研究以乳桿菌為指示菌，從泡菜中分離乳桿菌噬菌體，鑒定，并研究其生物學(xué)特性和篩選抗噬菌體菌株。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　采用雙層瓊脂平板法，以不同乳桿菌為宿主菌，分離獲得了一株L.brevis ATCC367

2、菌株的烈性噬菌體，命名為Lb;一株L.plantarum WCFS1菌株的烈性噬菌體，命名為Lpla。對這兩株噬菌體主要特性進(jìn)行了鑒定。電鏡觀察顯示，Lpla由多面體頭部和非收縮性尾部組成，根據(jù)形態(tài)將其歸為Siphoviridae科，B1類;Lb由多面體頭部和收縮性尾部組成，根據(jù)形態(tài)將其歸為Myoviridae科，A1類。Lpla噬菌體基因組大小約53kb，為異質(zhì)平末端，其包裝機(jī)制屬滿頭包裝，即pac-型;Lb基因組大小約46kb，含粘

3、性末端，其包裝機(jī)制屬cos-型。一步生長曲線測定表明，Lb潛伏期和裂解期分別是165min和105min，裂解量是62 PFU/cell; Lpla的潛伏期和裂解期分別為15min和180 min，裂解量為43 PFU/cell。Ca2+和Mg2+促進(jìn)宿主細(xì)胞裂解和噬菌斑的形成。噬菌體穩(wěn)定性的檢測結(jié)果顯示，噬菌體Lb和Lpla對酸、堿有較強(qiáng)的耐受性，在pH3-12范圍內(nèi)活性相對穩(wěn)定;對乙醇和異丙醇的耐受性較低，35％和25％的乙醇（異丙

4、醇）分別處理Lb和Lpla40min后檢測不到活的噬菌體;紫外處理20min可使98％的Lpla和77％的Lb失活;Lb和Lpla對溫度的耐受性也較低，56℃處理Lb10min和56℃處理Lpla2min即可使Lb和Lpla全部滅活;不同理化因素對噬菌體吸附性質(zhì)影響的檢測結(jié)果顯示，Lb噬菌體在32℃時吸附率最大，可達(dá)96.75％，而到50℃時，吸附率最小，為83％。對于Lpla噬菌體，在4℃時，吸附率最大，為98.3％，而45℃時，該噬

5、菌體的吸附率最小，為1.5％; Ca2+、Mg2+的添加能促進(jìn)噬菌體對宿主菌的吸附;Lb和Lpla均可分別吸附到熱滅活處理的宿主菌上，但吸附率分別下降50％和20％。對噬菌體受體的分析結(jié)果顯示，Lb和Lpla的受體對熱敏感，Lb的受體與肽聚糖、鼠李糖和半乳糖有關(guān);Lpla的受體與肽聚糖相連的細(xì)胞壁聚合物多糖有關(guān)。噬菌體Lb的部分序列與噬菌體Lv-1相似性為71％，Lpla的部分序列與植物乳桿菌噬菌體LP65相似性為74％。噬菌體Lb和l

6、pla的表型及基因型特征均表明，這兩株噬菌體為新發(fā)現(xiàn)的乳桿菌噬菌體。
　　本實驗探索了噬菌體的有效保存方法。數(shù)據(jù)顯示，穩(wěn)定劑甘油和二甲基亞砜保存效果相似，短期保存不超過2個月，不同保存溫度對噬菌體無明顯影響;長期保存時，溫度為-80℃，效果較好，其次是-40℃。未經(jīng)過濾除菌的噬菌體和過濾除菌的噬菌體保存效果沒有明顯差別。因此，以甘油或二甲基亞砜為穩(wěn)定劑，把噬菌體懸液放置于-80℃或-40℃中保存是實驗室保存噬菌體較為理想的方法。<