棉花纖維素合酶基因CesAs克隆和酶活性分析.pdf

1、分 類 號(hào) 密 級(jí) :華 中農(nóng)業(yè)大 學(xué)碩 士學(xué)位論文棉 花 纖 維 素 合 酶 基 因 C e s A 、的克 隆和 酶 活 . 性分 析C lo n in go fC o tto n 〔 砂 ￡ 刁 G e n e sa n dA ctiv ityA n a ly siso fC E S AC o m P le xinv itro研 究 生 :指 導(dǎo)教 師 :王 如 意彭 良才 教 授夏 濤 副教授專業(yè) : 作物遺傳 育種 研 究方

2、向: 棉花纖 維 素 生物合 成機(jī) 理獲得 學(xué)位 名稱 : 農(nóng)學(xué)碩士 獲得 學(xué)位 時(shí)間: 2011 年 6 月 26 日華 中農(nóng)業(yè) 大學(xué)植 物科學(xué)技術(shù) 學(xué) 院作物遺 傳 改 良國(guó)家重 點(diǎn)實(shí)驗(yàn) 室生物 質(zhì) 與 生物 能源研 究 中心二 O 一 一 年六 月華 中 農(nóng) 業(yè) 少 、 學(xué) 20 ] ] 屆 傾 }一 司 {究 生 學(xué) 位 論 義2 4 . 5E.coli 感 受 態(tài) 細(xì) 胞 制 備 . . . . . . . . . . . .

3、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …… 162 . 4 . 6 外 源 片 段 的轉(zhuǎn) 化 及 檢 測(cè) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

4、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . …… 162 . 4 . 7 快 速 擴(kuò) 增 cD N A 末 端 (R A C E ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

5、 . . . …… 172 . 5 載 體 構(gòu) 建 及 農(nóng) 桿 菌 介 導(dǎo) 的遺 傳 轉(zhuǎn) 化 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……222 . 5.1G h尸 人 更 E J 和 G hP E L 超 表 達(dá) 載 體 的構(gòu) 建 . .

6、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……222 . 5. 2 Gh 尸 人 王 E ] 和 G 胡 一 ]， 3一luca nas。的 RN A i載 體 構(gòu) 建 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……222. 5. 3 花 粉

7、 管通 道 法 遺 傳 轉(zhuǎn) 化 棉 花 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……232 . 6 棉 花 纖 維 素 合 酶 活 性 鑒 定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

8、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……242 . 6 .1 棉 纖 維 膜 蛋 白 的 提 取 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

9、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……242 . 6. 2 纖 維 素 體 外 合成 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

10、. . . . . . ……， . . …252 . 6. 3 免 疫 共 沉 淀 (C O一 IP ) . . . . . . ……， . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . …262. 6 . 4S D S 一 P A G E ... ................

11、................ .. ......... ..................... ...... .... .. .. ..........…… 2 62. 6 . 5W estemblo tt i n g ..... ... .. ...... .......... ......... .. .......... .... .. ... .......……， . ............… … 2 82 . 7 目

12、的 蛋 白純 化 . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……282 . 7.1 原 核 表 達(dá) 蛋 白的 純 化

13、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……282 . 7. 2 抗 體 純 化 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

14、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……303 結(jié) 果 與 分 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

15、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……313 .1G h C es月石 、G h Ce sA 夕 和 G hP 龍王了全 長(zhǎng) cD N A 克 隆 . . . . . .

16、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……313 .1.1 序 列 比對(duì) 和 引 物 設(shè) 計(jì) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

17、. . . . . . . ……313 .1. 2Gh C esA 石全 長(zhǎng) cD N A 克 隆 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …… ‘ . . . . ……323 .1. 3G hC es月夕 全 長(zhǎng) cD N A 克 隆 . . . . . . .

18、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……333 .1. 4G hP 煙王] 基 因 克 隆 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

19、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . ……353 . 2G hC E SA s 和 G hP M E I 生 物 信 息 學(xué) 分 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

20、. . . . . . . . . ……363. 2.1G hC E SA s 和 G hP M E I 的保 守 結(jié) 構(gòu) 域 分 析 . . .. . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……363 . 2. 2 植 物 C E SA S 和 P M Es 的 聚 類 分 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

21、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……383 . 2. 3G hC E SA s 和 G hP M EI 跨 膜 結(jié) 構(gòu) 分 析 . . . . ……， . . ……， . . ……、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……4 03 . 2 . 4G hC E S A s 和 G bP M E I 分

22、子 量 和 等 電 點(diǎn) 分 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . ……413. 3G hCe sA 6 、G hCe sA 夕 和 G h尸 人 扭 了 m R N A 表 達(dá) 模 式 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……413 . 4G h